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腺相关病毒载体包装
📝 服务介绍
AAV包装利用无辅助质粒共转染系统在293T细胞中生产重组腺相关病毒，因其免疫原性极低、长期表达、组织嗜性可调等优势，成为基因治疗和神经科学体内基因递送的首选载体。
🔬 实验原理
AAV包装原理：腺相关病毒(AAV)是一种复制依赖型病毒，需辅助病毒(腺病毒/单纯疱疹病毒)提供辅助基因才能复制。重组AAV(rAAV)仅保留ITR和目的基因(transgene)，删除了rep和cap基因，在HEK293T中用三质粒系统包装，是体内基因传递的安全工具。
📋 应用领域
- 神经/肌肉/肝脏/心肌等组织靶向基因递送
- 外源基因体内稳定长期表达
- 基因治疗载体开发（可兼容AAV1-9/AAV2/AAV8）
- 条件性表达（Cre/loxP体系）载体
- AAV介导基因敲降（shRNA）
- 空间特异细胞类型靶向标记
⭐ 服务优势
- 低免疫原性：体内长期表达
- 组织特异性：不同血清型靶向不同组织
- 长期表达：episomal存在不整合
- 多血清型：AAV2/5/8/9/PHP.eB等可选
🔄 服务流程
- 目的基因克隆至AAV转移质粒
- 293T细胞培养，三质粒共转染
- 72h收集细胞，裂解释放病毒
- 碘克沙醇梯度超速离心纯化
- 滴度测定（qPCR/ELISA）
- 质控检测
📋 服务详情 / 客户提供
| 项目 | 要求 |
|---|---|
| 目的基因序列 | CDS序列，注明物种来源 |
| 血清型选择 | AAV2/5/8/9/PHP.eB等 |
| 启动子 | CMV/CBA/CaMKIIa/特异性启动子等 |
| 滴度要求 | 常规10^11或超高10^12 VG/mL |
📊 结果展示
交付纯化AAV病毒液（含滴度报告）、血清型鉴定报告、质控检测报告。
📦 最终交付
交付纯化AAV病毒液（含滴度报告）、血清型鉴定报告、质控检测报告。
Q: AAV不同血清型如何选择
AAV9广泛分布（心/肝/肌/中枢神经）；AAV8肝/视网膜；AAV5呼吸道/中枢神经；PHP.eB全脑跨血脑屏障；AAV2适合体外。建议参考文献选择。
Q: AAV包装产量低怎么改善
使用超纯质粒（内毒素<0.1EU/ug）、293T汇合度70-80%、PEI新鲜配制、裂解充分（冻融3次+超声）。
Q: AAV包装怎么做
1)293T细胞铺板(15cm皿 15×10^6)；2)PEI共转染三质粒：pAAV-MCS(转移质粒含目的基因)+pHelper(辅助基因E2A/E4/VA)+pRC/AAV2/8(Cap和Rep，决定血清型)；3)72h收集细胞(不含上清，AAV在细胞内)；4)冻融3次裂解→Benzonase消化→碘克沙醇梯度离心纯化→超滤浓缩；5)qPCR测定基因组滴度(vg/mL)。
Q: AAV血清型怎么选
AAV2(广泛，体外常用)、AAV5(呼吸道)、AAV8(肝脏>90%感染)、AAV9(心肌/中枢神经/全身)、AAVrh10(肺/心脏)、AAV-PHP.B(穿越血脑屏障)、AAV6(肌肉/造血干细胞)、AAV-DJ(高效感染多种细胞)。选血清型依据靶组织：肝脏选AAV8、心脏选AAV9、脑选AAV9/PHP.B、肺选AAV5/6。
Q: AAV滴度怎么测定
1)qPCR法：提取病毒基因组DNA→设计ITR引物→qPCR测定基因组拷贝(vg/mL)，最常用；2)ELISA：检测衣壳蛋白(Cap)含量(物理滴度，包含空壳病毒)；3)TCID50：感染检测(功能滴度，但AAV需辅助病毒共感染)；4)SDS-PAGE：检测VP1/2/3蛋白比例。建议qPCR测基因组滴度+SDS-PAGE确认纯度。
Q: AAV和慢病毒体内实验怎么选
AAV：非整合型(附加体)，免疫原性低，适合体内基因治疗(肌肉/脑/肝/心)，表达持久(非分裂细胞>1年)，但容量小(4.7kb)。慢病毒：整合型(随机整合)，适合体外/体外细胞稳定表达，体内免疫原性高(产生抗体清除)，但容量大(8-10kb)。体内基因治疗选AAV，体外稳定表达选慢病毒。
Q: AAV包装容量限制
AAV包装容量约4.7kb(ITR之间)。超出容量导致包装效率极低或截短包装。常见问题：1)目的基因+启动子+polyA超4.7kb(换用小启动子如CBh代替CMV，或scAAV不需ITR间隔)；2)荧光融合蛋白过大(选小标签如FLAG/HA代替GFP)；3)大基因(如DMD 14kb)用双AAV系统(intein-mediated拼接)。