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赖氨酸乙酰化修饰组学
📝 服务介绍
乙酰化蛋白质组利用抗乙酰化赖氨酸抗体富集乙酰化肽段，通过质谱鉴定和定量蛋白质赖氨酸乙酰化修饰，研究代谢调控、表观遗传和信号转导。
🔬 实验原理
乙酰化蛋白质组原理：蛋白质乙酰化是赖氨酸残基N端或侧链的乙酰化修饰(N-乙酰化和K-乙酰化)。K-乙酰化(如组蛋白H3K9ac/H3K27ac)调控基因表达和染色质开放。乙酰化肽段经抗体富集后LC-MS/MS检测乙酰化位点和丰度变化。
📋 应用领域
- 乙酰化蛋白组鉴定与定量
- K-acetyl位点功能分析
- 代谢酶/转录因子乙酰化调控
- 乙酰化与代谢/表观关联研究
- 去乙酰化酶(SIRT)底物发现
- 乙酰化动态修饰变化研究
⭐ 服务优势
- 全局乙酰化位点鉴定
- 代谢调控研究利器
- 位点特异性精确定位
- 兼容定量分析
🔄 服务流程
- 蛋白提取（需加HDAC抑制剂TSA/NAM）
- 定量酶切
- 抗乙酰化赖氨酸抗体富集
- LC-MS/MS分析
- 乙酰化位点鉴定和定量
- 代谢通路和表观调控分析
📋 服务详情 / 客户提供
| 项目 | 要求 |
|---|---|
| 样品 | 蛋白>=2-5mg/样本 |
| 样本数量 | >=2组 每组>=2-3重复 |
| 处理要求 | 提取时加TSA(1uM)+NAM(10mM)抑制去乙酰化酶 |
| 分析需求 | 乙酰化位点/代谢通路/表观调控 |
📊 结果展示
乙酰化位点列表、火山图、代谢酶乙酰化分析、通路富集及实验报告。
📦 最终交付
乙酰化位点列表、火山图、代谢酶乙酰化分析、通路富集及实验报告。
Q: 乙酰化蛋白质组为什么要加HDAC抑制剂
细胞裂解后去乙酰化酶（HDAC）仍可去除乙酰化修饰导致假阴性。提取液中必须添加泛HDAC抑制剂TSA（1uM）和NAM（10mM，抑制III类HDAC/Sirtuin），在4C低温操作减少去乙酰化。
Q: 乙酰化和磷酸化如何联合分析
可在同一项目中对同一批样品分两份分别做磷酸化富集和乙酰化富集，然后联合分析调控网络。磷酸化反映信号通路激活，乙酰化反映代谢调控/表观修饰，联合分析揭示crosstalk。
Q: 乙酰化蛋白质组怎么做
1)蛋白提取(含TSA/烟酰胺脱乙酰酶抑制剂)；2)胰酶消化→肽段；3)抗乙酰化赖氨酸抗体富集(PTMScan Acetyl-Lysine Motif Kit)；4)富集后肽段LC-MS/MS；5)搜库定位乙酰化位点。需5-10mg总蛋白。TMT标记+乙酰化抗体富集可定量乙酰化变化(6-16通道)。
Q: 乙酰化位点怎么定位
碎片离子(b/y离子含乙酰化Lys增加42Da)。乙酰化位点定位概率>0.75为可信位点。EThcD碎裂保留乙酰基团提高定位准确性。HCD碎裂可能丢失乙酰基团(生成 fragment ion)。建议HCD+EThcD混合碎裂模式平衡碎裂效率和位点定位。
Q: 乙酰化能做什么研究
1)组蛋白乙酰化(H3K9ac/H3K27ac/H4K16ac)基因调控/染色质开放(ChIP-seq关联)；2)非组蛋白乙酰化(代谢酶/转录因子/肿瘤抑制因子)；3)代谢调控(乙酰CoA浓度反映代谢状态)；4)去乙酰化酶靶点(SIRT1/2/3/HDAC1/2/3)；5)药物处理(HDAC抑制剂TSA/SAHA)乙酰化变化。整合蛋白组+乙酰化组全面分析。
Q: 乙酰化和甲基化区别
乙酰化(+42Da)赖氨酸侧链乙酰基，开放染色质(组蛋白H3K9ac=活性启动子)，可逆(乙酰转移酶HAT+去乙酰化酶HDAC)。甲基化(+14Da)赖氨酸/精氨酸侧链甲基，可激活或抑制(取决于位点，H3K4me3=激活，H3K27me3=抑制)，可逆(甲基转移酶+去甲基化酶)。两者互作("bivalent domain" H3K4me3+H3K27me3)。
Q: 乙酰化蛋白质组需要多少蛋白
5-10mg总蛋白(乙酰化肽段丰度低)。抗乙酰化赖氨酸抗体富集后肽段5-15%为乙酰化肽段。建议5-10mg细胞裂解液蛋白起始(约5×10^7-10^8细胞)。TMT标记+乙酰化抗体富集可减少蛋白量。HDAC抑制剂处理(TSA 1μM 6h)可增加乙酰化水平提高检测覆盖率。