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泛素化修饰蛋白质组学
📝 服务介绍
泛素化蛋白质组利用抗K-GG抗体富集泛素化修饰位点（胰酶酶切后保留的GG标记），通过质谱在全蛋白质组范围鉴定和定量泛素化修饰，研究蛋白降解和泛素信号通路。
🔬 实验原理
泛素化蛋白质组原理：蛋白质泛素化是赖氨酸残基共价连接泛素(8.5kDa)。泛素链通过K48/K63等不同连接方式介导不同功能(蛋白酶体降解/信号传导/自噬)。泛素化肽段经胰酶消化产生GG标签(残留2个Gly在Lys上)，通过K-ε-GG抗体富集后LC-MS/MS检测泛素化位点和丰度。
📋 应用领域
- 泛素化位点鉴定与定量
- K48/K63等连接类型分析
- 泛素化蛋白底物发现
- 泛素pH信号通路调控
- 蛋白酶体降解/稳定关系研究
- 去泛素化酶靶点研究
⭐ 服务优势
- 全局泛素化位点：数千个位点鉴定
- 位点特异性：精确定位泛素化Lys
- 通路分析：UPS/自噬/蛋白降解
- 兼容定量：TMT/LF定量
🔄 服务流程
- 蛋白提取定量（>=2mg/样本）
- 胰酶酶切
- K-GG抗体富集泛素化肽段
- LC-MS/MS分析
- 泛素化位点鉴定和定量
- UPS通路和降解信号分析
📋 服务详情 / 客户提供
| 项目 | 要求 |
|---|---|
| 样品 | 蛋白>=2mg/样本（富集需要大量蛋白） |
| 样本数量 | >=2组 每组>=2-3重复 |
| 分组 | 对照/实验组 |
| 修饰类型 | 泛素化（K-GG motif） |
| 分析需求 | 泛素化位点/UPS通路/降解分析 |
📊 结果展示
泛素化位点列表（位点/倍数变化/p-value）、火山图、UPS通路富集分析及实验报告。
📦 最终交付
泛素化位点列表（位点/倍数变化/p-value）、火山图、UPS通路富集分析及实验报告。
Q: 泛素化蛋白质组需要多少起始蛋白
建议每样本>=2mg总蛋白（因为泛素化肽段占比极低<1%）。蛋白质组起始量不足会导致鉴定数少。可通过增加细胞量（>=10^8）或TMT多重标记后混合富集提高效率。
Q: K-GG抗体富集和泛素-链免疫印迹有何区别
K-GG抗体捕获所有泛素化位点（通过胰酶切割后GG tag），全局鉴定泛素化位点；泛素-链免疫印迹检测特定类型泛素链（K48/K63等）提供链类型信息。两者互补。
Q: 泛素化蛋白质组怎么做
1)蛋白提取(含NEM/碘乙酰胺烷基化去泛素酶抑制剂)；2)胰酶消化→肽段；3)K-ε-GG抗体免疫富集(PTMScan Ubiquitin Branch Motif Kit)；4)富集后肽段LC-MS/MS；5)搜库(MaxQuant/MSFragger)定位泛素化位点。需10-20mg总蛋白(泛素化肽段丰度极低)。TMT标记+K-ε-GG富集可定量泛素化变化。
Q: 泛素化检测和泛素互作蛋白区别
泛素化蛋白质组(PTM-UBi)检测泛素化修饰位点和丰度(直接检测GG标签)。泛素互作蛋白(AP-MS)检测与泛素或泛素链结合的蛋白(间接互作)。泛素化位点分析(PTM)→了解哪些蛋白被泛素化/泛素化位点/丰度变化。泛素互作蛋白(AP-MS)→了解泛素信号通路调控蛋白。两者互补。
Q: 泛素化链类型怎么分析
1)K48(蛋白酶体降解)；2)K63(DNA损伤/自噬/内吞)；3)K11(ERAD)；4)M1(线性链/NF-κB)；5)K6/K27/K29/K33。泛素链类型分析：1)Ubiquitin-Chain (Middle-down)：Top-down/中分子量质谱分析泛素链类型；2)链特异性抗体(K48/K63特异性抗体WB)；3)突变体分析(KR突变阻断特定连接)。
Q: 泛素化蛋白质组需要多少蛋白
10-20mg总蛋白(泛素化肽段丰度极低，需大量蛋白+富集)。K-ε-GG抗体富集后肽段5-10%为泛素化肽段。建议10-20mg细胞裂解液蛋白起始(约10^8细胞)。TMT标记+K-ε-GG富集可减少蛋白量(多通道定量)。FFPE样本不适合(交联影响GG标签检测)。
Q: 泛素化和SUMO化区别
泛素化(76aa, 8.5kDa)连接泛素(UBB/UBC/UBB)调控蛋白酶体/信号/自噬。SUMO化(101aa, 11kDa)连接SUMO1/2/3调控核转运/转录/DNA修复。SUMO化位点(QTGG)需不同抗体富集。泛素化更广泛(>10,000位点)，SUMO化更少(约1000-3000位点)。两者互作(SUMO-targeted ubiquitin ligase STUbL)调控降解。