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Cell Counting Kit-8 细胞增殖检测
📝 服务介绍
CCK8利用WST-8试剂在细胞线粒体脱氢酶作用下生成甲瓒染料，通过酶标仪读取OD450定量反映活细胞数量，是药物筛选和细胞毒性评价最常用的方法。
🔬 实验原理
CCK-8原理：WST-8被细胞线粒体脱氢酶还原为水溶性橙黄色甲瓒染料（Formazan），其生成量与活细胞数量成正比。通过450nm吸光度检测，定量评估细胞增殖和毒性。相比MTT，WST-8产物水溶性更好、无需溶解步骤、灵敏度更高。
📋 应用领域
- 细胞增殖活性检测
- 药物/化合物细胞毒性评估（IC50）
- 细胞因子/生长因子促增殖效应评价
- 抗肿瘤药物筛选与敏感度评估
- 辐射/氧化损伤对细胞活力影响
- 共培养体系的增殖监控
⭐ 服务优势
- 操作简便：加试剂即读无需洗涤
- 灵敏度高：优于MTT法
- 重复性好：批次内CV<10%
- 安全无毒：无放射性
🔄 服务流程
- 细胞接种96孔板（2000-10000/孔）
- 贴壁后加药处理
- 指定时间点加CCK8试剂10uL/孔
- 37C孵育1-4h
- 酶标仪读取OD450
- 绘制增殖曲线/IC50计算
📋 服务详情 / 客户提供
| 项目 | 要求 |
|---|---|
| 细胞系 | 指定细胞系名称及来源 |
| 药物信息 | 药物名称/浓度梯度/处理时间 |
| 对照组 | 阳性/阴性对照药或溶媒对照 |
| 检测时间点 | 24h/48h/72h等 |
📊 结果展示
交付OD450原始数据表、增殖曲线图/IC50计算图（含统计检验）及实验报告。
📦 最终交付
交付OD450原始数据表、增殖曲线图/IC50计算图（含统计检验）及实验报告。
Q: CCK8检测OD值偏低是什么原因
可能：细胞接种密度过低、药物抑制效应过强、CCK8试剂失效或孵育时间不足。建议设空白孔（仅培养基+CCK8）作基线。
Q: CCK8与MTT法如何选择
CCK8灵敏度更高、操作更简便、重复性更好。MTT成本更低但步骤繁琐。一般推荐CCK8。
Q: CCK-8和MTT有什么区别
CCK-8产物水溶性（不需DMSO溶解）、灵敏度更高（检测5,000细胞）、重复性好、可连续检测。MTT产物不溶需DMSO溶解、步骤多、灵敏度低（需10,000+细胞）。建议优先用CCK-8。
Q: 边缘效应怎么消除
96孔板边缘孔蒸发快导致误差。建议：1)边缘孔加PBS/培养基不加细胞；2)实际使用60孔（去掉外周36孔）；3)加样后轻弹混匀；4)培养箱内水盘保持湿度。也可使用96孔→24孔板规避。
Q: OD值异常偏高或偏低怎么办
偏高：接种细胞过多（建议2000-10000/孔）、CCK-8加量过多（10μL/100μL培养基）、培养时间过长。偏低：细胞活力低、CCK-8失效（注意4°C避光保存有效期6个月）、培养基含酚红/血清干扰。
Q: 药物处理时间点怎么选
根据药物作用机制选择：化疗药24-48h看直接杀伤；靶向药48-72h看增殖抑制；抗增殖药3-5天看集落形成。建议做时间梯度（24/48/72h）确定最佳检测点。加入CCK-8前换新鲜培养基。
Q: 如何计算IC50
设置药物浓度梯度（0.01-100μM 6-8个浓度），每个浓度3-6复孔，作用48-72h后CCK-8检测。用GraphPad Prism做非线性回归（Log(inhibitor) vs response），拟合四参数曲线计算IC50值。需R²>0.95。