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生物层干涉技术
📝 服务介绍
BLI利用光纤探针表面固定配体，通过检测干涉光信号随分析物结合产生的膜厚度变化，实现无标记、实时分子互作分析。Octet系统通量高、操作简便、耗材成本低。
🔬 实验原理
BLI原理：生物膜干涉技术。分子固定在光纤探针尖端，浸入样品溶液时结合/解离改变探针表面光层厚度，检测干涉光谱位移(波长偏移nm)，实时测量分子互作动力学和亲和力。无需标记、不需流路系统。
📋 应用领域
- 蛋白-蛋白/蛋白-核酸结合动力学
- 生物层干涉法无标记相互作用分析
- 药物-靶标结合与解离实时监测
- 抗体亲和力排序与筛选
- 重组蛋白/多肽结合特异性验证
- 高通量相互作用筛选
⭐ 服务优势
- 无标记检测：实时信号变化
- 高通量：96通道同时检测
- 耗材成本低：比SPR经济
- 兼容粗样品：耐受细胞培养上清
🔄 服务流程
- 配体固定在生物传感器探针（SA/AR2G/AHC）
- 基线平衡
- 分析物结合（梯度浓度）
- 解离阶段
- 参比探针扣除背景
- 1:1模型拟合动力学参数
📋 服务详情 / 客户提供
| 项目 | 要求 |
|---|---|
| 配体 | 固定在探针上的分子（需生物素化或His标签） |
| 分析物 | 溶液中的分子（蛋白/抗体/小分子） |
| 探针类型 | SA（链霉亲和素）/AR2G（氨基反应）/His-capture |
| 分析模式 | 动力学/亲和力/定量 |
| 样品量 | 配体>=20ug 分析物>=50ug |
📊 结果展示
BLI传感图（结合/解离曲线）、KD/Kon/Koff参数表、拟合曲线及实验报告。
📦 最终交付
BLI传感图（结合/解离曲线）、KD/Kon/Koff参数表、拟合曲线及实验报告。
Q: BLI和SPR如何选择
SPR（Biacore）灵敏度更高（pM级）适合小分子和低亲和力互作；BLI（Octet）通量高、成本低、操作简便适合抗体筛选和常规互作。需最高精度动力学选SPR，高通量筛选选BLI。
Q: BLI信号弱怎么办
确认配体固定量足够（Loading信号>0.8nm）、分析物浓度在KD附近或更高（5-10x KD）、探针水化充分（至少10min）、缓冲液匹配（再生后基线稳定）。
Q: BLI和SPR哪个好
BLI：浸入式、多通道(8-16通道并行)、耗样少(20-50μL/孔)、不需流路、高通量筛选好，但精度略低、基线漂移大。SPR：流式系统、精度高、数据质量好、动力学拟合精确，但耗样多、通量低。高通量初筛选BLI(Bio-Layer Interferometry)，精确定量验证选SPR。
Q: BLI探针类型有哪些
SA(Streptavidin)：生物素标记蛋白捕获。Ni-NTA：His标签蛋白捕获。Protein A/G：Fc段/抗体捕获。APS(Aminopropylsilane)：氨基偶联共价固定。AR2G：第二代抗生物素。Anti-His：His标签捕获。建议SA+生物素标记(定向固定信噪比高)或Ni-NTA+His标签(简便)。
Q: BLI实验设计
1)Baseline(缓冲液60s)；2)Loading(固定蛋白60-120s达到0.8-1.5nm)；3)Baseline2(洗涤60s)；4)Association(分析物结合60-120s)；5)Dissociation(解离60-120s)；6)Regeneration(再生0.5M Glycine pH2.5或10mM Glycine pH1.7)。分析物设5-8个浓度梯度。
Q: BLI能检测小分子吗
可以。BLI检测小分子(分子量>200Da)结合蛋白的信号变化(结合后光层厚度变化)。但小分子信号弱(Rmax小)，需高固定密度(蛋白)和高分析物浓度。建议小分子用SPR(灵敏度更高)或MST(微量热泳动)。BLI适合蛋白-蛋白互作(分子量大信号强)。
Q: BLI数据怎么分析
ForteBio Octet软件或在Excel/WA软件拟合。1)减背景(双参照：参比探针+空白孔)；2)Y轴对齐(Baseline最后5s)；3)1:1模型拟合kon/koff/KD；4)R²>0.9为合格；5)Rmax需合理(<理论值2倍)。设至少5个浓度梯度。每组重复≥2次。KD范围pM-mM。