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N-/O-糖基化修饰组学
📝 服务介绍
糖基化蛋白质组通过凝集素富集或化学标记法富集糖基化肽段，利用质谱鉴定N-连接和O-连接糖基化位点及糖链结构，研究糖蛋白功能和疾病标志物。
🔬 实验原理
糖蛋白质组原理：糖蛋白质组研究蛋白质糖基化修饰(N-连接糖基化Asn-X-Ser/Thr和O-连接糖基化Ser/Thr)。糖肽经凝集素富集或HILIC富集后，LC-MS/MS检测糖肽和糖型。N-糖苷酶F(PNGase F)去除N-糖链后定位糖基化位点。糖型分析揭示糖基化异质性和功能。
📋 应用领域
- 糖基化蛋白组位点鉴定与定量
- N-/O-糖基化位点表征
- 糖蛋白富集与鉴定
- 糖链结构与糖基化程度分析
- 糖基化对蛋白功能影响
- 疾病相关糖蛋白标志物研究
⭐ 服务优势
- 位点+糖链结构双重信息
- N-糖/ O-糖分析
- 疾病标志物开发
- 兼容定量分析
🔄 服务流程
- 蛋白提取酶切
- 糖基化肽段富集（HILIC/ZIC-HILIC/凝集素）
- PNGase F释放N-糖链（N-糖分析）
- LC-MS/MS分析
- 糖基化位点鉴定和糖链结构解析
- 定量和差异分析
📋 服务详情 / 客户提供
| 项目 | 要求 |
|---|---|
| 样品 | 蛋白>=1-2mg/样本 |
| 样本数量 | >=2组 每组>=2-3重复 |
| 修饰类型 | N-糖基化/O-糖基化/两者 |
| 分析需求 | 位点鉴定/糖链结构/定量比较 |
| 特殊要求 | 是否需要糖链结构解析 |
📊 结果展示
糖基化位点列表、糖链结构组成、差异糖基化分析及实验报告。
📦 最终交付
糖基化位点列表、糖链结构组成、差异糖基化分析及实验报告。
Q: N-糖基化和O-糖基化分析有何区别
N-糖通过PNGase F酶切释放N-糖链并标记脱氨基位点（Asn->Asp）鉴定位点；O-糖缺乏通用酶切工具，需化学释放（b-消除）或使用OpeRATOR酶。N-糖分析更成熟，建议先做N-糖。
Q: 糖蛋白质组学能解析糖链结构吗
可以，通过HCD+ETD混合碎裂模式获得糖肽二级谱图，使用Byonic/pGlyco等软件解析糖链组成（如HexNAc2Hex5等）。但精确连接位置异构体难以区分，需结合离子迁移率质谱。
Q: 糖蛋白质组怎么做
1)蛋白提取+胰酶消化→糖肽；2)凝集素富集(ConA/WGA富集不同糖型)；3)HILIC富集(亲水色谱富集糖肽)；4)PNGase F去除N-糖链(去糖基化肽段质量增加+0.984Da，Asn→Asp)→定位糖基化位点；5)完整糖肽LC-MS/MS(HCD/CID/EThcD碎裂)分析糖型。需1-5mg总蛋白。
Q: N-糖基化和O-糖基化区别
N-糖基化：Asn-X-Ser/Thr(X≠Pro)天冬酰胺连接，糖链型(高甘露糖/杂合/复杂型)，PNGase F去除。O-糖基化：Ser/Thr连接，糖链简单(GalNAc核心)，无通用酶去除(需化学释放β-消除)。N-糖蛋白质组更成熟(富集/位点定位)。O-糖蛋白质组更难(富集方法不通用)。建议先做N-糖蛋白质组。
Q: 糖型分析怎么做
完整糖肽(N-glycopeptide)经HCD碎裂产生糖碎片离子(oxonium ions: m/z 204.09 HexNAc+、366.14 Hex-HexNAc+)确认糖肽。EThcD碎裂保留糖肽骨架产生b/y离子定位糖基化位点。糖型推断：质量差计算糖组成(Hex=162, HexNAc=203, Fuc=146, Sialic acid=291)。可用GlycoWorkbench/Byonic分析糖型。
Q: 糖蛋白质组能做什么
1)疾病标志物(肝癌AFP-L3/前列腺癌PSA糖型)；2)抗体药物糖型分析(ADCC/CDC效应依赖Fc糖型)；3)糖基转移酶功能(ST6GAL1/FUT8)；4)细胞表面糖蛋白(凝集素亲和富集膜糖蛋白)；5)病毒糖蛋白(流感HA/HIV gp120糖型)。糖型异质性反映糖基化酶活性和代谢状态。
Q: 糖蛋白质组需要多少蛋白
1-5mg总蛋白(糖肽丰度低+富集)。N-糖蛋白质组：1-2mg蛋白+凝集素/HILIC富集+PNGase F。O-糖蛋白质组：2-5mg(富集效率低)。完整糖肽分析：1-5mg+HILIC富集。建议3-5mg起始蛋白。膜糖蛋白需额外去垢剂溶解(1% Triton X-100/SDS→除垢后HILIC富集)。