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免疫组织化学染色
📝 服务介绍
免疫组化利用抗原-抗体特异性结合原理，通过DAB显色在组织切片上定位目标蛋白的表达位置和水平，是病理诊断、标志物验证、分子分型的核心技术。
🔬 实验原理
IHC原理：组织切片经脱蜡复水后，通过抗原修复暴露表位，特异性一抗结合靶抗原，酶标二抗（HRP/AP）催化底物（DAB显棕褐色/BCIP-IP显蓝色）在原位显色，苏木素复染细胞核，脱水封片后显微镜观察。
📋 应用领域
- 肿瘤标志物蛋白定位与表达检测
- 分子分型与预后评估（ER/PR/HER2等）
- 药物靶点蛋白表达验证
- 信号通路蛋白激活(磷酸化)组织学定位
- 细胞起源/分化抗原鉴定
- 临床病理诊断辅助（免疫组化标记）
⭐ 服务优势
- 高特异性：抗原-抗体精准识别
- 定位信息：蛋白表达位置一目了然
- 半定量：可结合ImageJ分析IOD值
- 兼容多重：可做双染/多重IHC
🔄 服务流程
- 组织固定包埋切片
- 脱蜡水化
- 抗原修复（柠檬酸钠/EDTA微波修复）
- 3% H2O2阻断内源性过氧化物酶
- 血清封闭
- 一抗4C过夜
- HRP二抗室温1h
- DAB显色
- 苏木素复染封片
📋 服务详情 / 客户提供
| 项目 | 要求 |
|---|---|
| 组织样本 | 石蜡切片/冰冻切片/细胞爬片 |
| 一抗信息 | 名称/品牌/货号/宿主/稀释比 |
| 实验分组 | 阳性/阴性组织对照确认 |
| 修复方式 | 建议修复方法或由平台优化 |
📊 结果展示
交付IHC染色图片（含低/高倍）、IOD半定量分析数据（ImageJ）、实验报告。
📦 最终交付
交付IHC染色图片（含低/高倍）、IOD半定量分析数据（ImageJ）、实验报告。
Q: IHC无信号或信号弱怎么排查
排查链路：一抗浓度做梯度预实验（1:50-1:500）、确认抗原修复方式（柠檬酸钠pH6.0/EDTA pH9.0）、检查DAB显色时间（3-10min）。建议先做阳性组织对照。
Q: IHC背景高怎么优化
增加血清封闭时间、降低一抗浓度、增加洗涤次数（PBS-T洗5次x5min）、缩短DAB显色时间、确认内源性过氧化物酶已充分阻断。
Q: 组织脱片怎么办
使用APES或多聚赖氨酸防脱片剂处理载玻片、切片后60°C烤片2h、修复时避免剧烈沸腾、洗涤时勿直接冲洗切片。使用带正电荷的防脱载玻片效果更好。冰冻切片用0.1%多聚甲醛后固定。
Q: 抗原修复怎么选
热修复（HIER）：柠檬酸钠buffer(pH6.0)或EDTA(pH9.0)微波/高压锅加热，适合甲醛固定导致交联的抗原。酶修复：胃蛋白酶(pH2)或蛋白酶K 37°C 10-15min，适合胞外基质蛋白。一般先用HIER pH6.0效果不好再换pH9.0。
Q: 背景染色深怎么解决
增加封闭时间（1-2h）、降低一抗浓度（做梯度摸索）、增加洗涤次数、优化DAB显色时间（显微镜监控）、使用背景增强剂（Background Buster）、血清封闭用与二抗同源动物血清。
Q: DAB显色太快/太慢怎么办
显色太快（背景深）：降低一抗浓度、缩短DAB时间（30s-2min）、DAB用前现配过滤。显色太慢（信号弱）：增加一抗浓度/孵育时间、延长DAB显色（5-10min）、检查二抗效价、修复不充分可加强修复。
Q: IHC和IF怎么选
IHC用DAB显色，适合组织形态学评估和病理评分，可长期保存。IF用荧光二抗，适合共定位分析和多标染色，需荧光显微镜，切片不能长期保存。病理诊断选IHC，蛋白共定位选IF。
Q: 冰冻切片和石蜡切片怎么选
石蜡切片形态好、可长期保存、但固定过程可能掩盖表位。冰冻切片抗原保存好、不需脱蜡、但形态稍差、不能长期保存。抗原修复困难选冰冻切片，形态要求高选石蜡切片。
Q: IHC结果如何评分
常用H-score：Σ(强度×该强度细胞比例)，范围0-300。强度分0(无)/1+(弱)/2+(中)/3+(强)。或用IRS评分系统（染色强度×阳性细胞比例）。建议由两位病理医生独立双盲评分。
Q: 组织脱片怎么办
APES或多聚赖氨酸处理载玻片、60°C烤片2h、修复时避免剧烈沸腾、洗涤勿直冲切片。冰冻切片用0.1%多聚甲醛后固定5min。使用带正电荷防脱载玻片。沸水修复时切片架不要直接接触锅底。
Q: 抗原修复怎么选
热修复(HIER)：柠檬酸钠(pH6.0)或EDTA(pH9.0)微波/高压锅加热。pH6.0适合多数抗原，pH9.0适合核抗原和难修复抗原。酶修复：胃蛋白酶(pH2)37°C10-15min，适合胞外基质和部分肽类抗原。一般先用pH6.0，效果不好换pH9.0。
Q: 背景染色深怎么解决
增加封闭(1-5%BSA或二抗来源动物血清)、降低一抗浓度(梯度摸索)、增加洗涤(0.1%Tween-20)、缩短DAB显色(显微镜监控)、使用背景增强剂。设阴性对照(不加一抗)评估背景水平。
Q: IHC结果如何评分
H-score=Σ(强度×该强度细胞比例)，范围0-300。强度分0(无)/1+(弱)/2+(中)/3+(强)。或IRS评分(染色强度×阳性比例)。阳性比例分0(0%)/1(<10%)/2(10-50%)/3(51-80%)/4(>80%)。需两位病理医生独立双盲评分。
Q: 冰冻切片和石蜡切片IHC怎么选
石蜡切片形态好、可长期保存、但固定掩盖表位需修复。冰冻切片抗原保存好、不需脱蜡、但形态差。抗原修复困难选冰冻切片，形态要求高选石蜡切片。临床病理多为石蜡切片。
Q: DAB显色太快/太慢怎么办
太快(背景深)：降低一抗浓度、缩短DAB(30s-2min)、DAB现配过滤。太慢(信号弱)：增加一抗浓度/孵育时间(4°C过夜)、延长DAB(5-10min)、检查二抗效价、加强修复。显微镜实时监控显色。