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N-末端肽组学
📝 服务介绍
N端蛋白质组利用COFRADIC或TAILS技术选择性富集蛋白N端肽段，鉴定蛋白质水解切割位点、N端修饰和蛋白降解，研究蛋白酶底物和降解信号通路。
🔬 实验原理
N末端蛋白质组原理：N末端蛋白质组分析蛋白质N端序列和N端修饰(N-乙酰化/去除起始Met)。通过化学标记(N-乙酰化阻断+胍基化/TEV酶切标记)选择性富集N末端肽段后LC-MS/MS分析，揭示蛋白质翻译起始/降解/剪切。
📋 应用领域
- N端蛋白质组学（N端组）分析
- 蛋白剪切/加工蛋白鉴定
- N端乙酰化修饰检测
- 信号肽剪切加工研究
- 噬菌体多肽N端定位
- 蛋白质成熟加工与降解途径
⭐ 服务优势
- 蛋白酶底物鉴定：揭示切割事件
- N端修饰分析：乙酰化/焦谷氨酸
- 蛋白降解研究：N-degron pathway
- 兼容定量分析
🔄 服务流程
- 蛋白提取和同位素标记（TMT/二甲基标记）
- 封闭内源游离a-氨基
- 胰酶酶切
- N端肽富集（TAILS聚合物或COFRADIC）
- LC-MS/MS分析
- N端肽鉴定和切割位点定位
📋 服务详情 / 客户提供
| 项目 | 要求 |
|---|---|
| 样品 | 蛋白>=1mg/样本 |
| 样本数量 | >=2组 每组>=2-3重复 |
| 研究目的 | 蛋白酶底物鉴定/N端修饰/蛋白降解 |
| 特殊要求 | 需明确研究蛋白酶（如caspase/MMP等） |
| 分析需求 | N端肽/切割位点/降解信号 |
📊 结果展示
N端肽列表、蛋白质切割位点定位、差异N端分析及实验报告。
📦 最终交付
N端肽列表、蛋白质切割位点定位、差异N端分析及实验报告。
Q: N端蛋白质组能鉴定哪些蛋白酶底物
TAILS/COFRADIC鉴定蛋白N端和新产生的neo-N端（蛋白酶切割产生）。比较对照组和蛋白酶激活组（如加caspase诱导凋亡）的新增N端肽，鉴定蛋白酶直接切割底物。
Q: N端乙酰化有何生物学意义
N端乙酰化（Nt-acetylation）由NAT催化，影响蛋白稳定性、定位和互作。N端规则 pathway（N-degron）将N端氨基酸类型与蛋白半衰期关联（Nt-acetylation标记降解）。
Q: N末端蛋白质组怎么做
1)蛋白提取+胍基化(阻断游离氨基)；2)TEV蛋白酶切(在标记的TEV位点切割→释放N端肽段)；3)N端肽段富集(生物素标记→链霉亲和素富集)；4)LC-MS/MS分析N端肽段；5)搜库鉴定N端序列和N端修饰(乙酰化/起始Met去除)。需1-5mg总蛋白。方法包括COFRADIC(TAILS/SCX分离)和HYTANE。
Q: N末端蛋白质组能做什么
1)蛋白质N端乙酰化(N-acetylation)分析(翻译后修饰)；2)蛋白降解(N-degron途径/N端规则通路)；3)蛋白酶剪切位点定位(Caspase/MMP剪切产生新N端)；4)翻译起始位点验证(非AUG起始/内含子起始)；5)蛋白质成熟信号肽切割位点。N端修饰分析揭示蛋白翻译/降解/剪切调控。
Q: N末端乙酰化有什么功能
N端乙酰化(Nα-acetylation)是70-80%人蛋白质的N端修饰(NatA/B/C/D/E复合体催化)。功能：1)蛋白质稳定性(N端乙酰化影响N-degron识别)；2)亚细胞定位(膜定位/核输入)；3)蛋白质互作(N端乙酰化影响复合物形成)；4)疾病(NatA/B复合体与肿瘤/神经退行性疾病)。N端乙酰化缺陷导致蛋白质降解。
Q: N末端和C末端蛋白质组区别
N末端：分析蛋白质N端序列和修饰(乙酰化/起始Met)。N端降解(N-degron)调控蛋白质半衰期。C末端：分析蛋白质C端序列(翻译终止/蛋白酶剪切C端)。C末端异戊烯化/泛素化。N末端分析方法更成熟(化学标记富集)。C末端分析方法较少(缺乏高效富集方法)。
Q: N末端蛋白质组需要多少蛋白
1-5mg总蛋白(需N端肽段富集去除内部肽段)。TAILS(Terminal Amine Isotope Labeling of Substrates)方法需1-2mg蛋白。COFRADIC(Combined Fractional Diagonal Chromatography)需2-5mg。TMT标记+N端富集可定量N端变化(6-16通道)。建议2-5mg起始蛋白。蛋白酶剪切分析(Caspase剪切)需处理前后对比N端变化。