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Matrigel Transwell侵袭实验
📝 服务介绍
细胞侵袭实验在Transwell膜上预铺Matrigel基质胶（模拟基底膜），检测细胞降解基质并穿越膜的能力，是评估肿瘤细胞侵袭能力的标准体外实验。
🔬 实验原理
Transwell侵袭原理：在Transwell膜上室面预铺Matrigel（基底膜基质提取物，含层粘连蛋白/IV型胶原/生长因子），细胞需分泌基质金属蛋白酶(MMP)降解Matrigel才能穿过膜孔迁移至下室。侵袭能力反映肿瘤细胞降解基底膜并迁移的恶性表型。
📋 应用领域
- 癌细胞侵袭能力评估（Transwell-Matrigel）
- 药物抑制肿瘤转移的侵袭实验
- 基质降解与侵袭相关蛋白酶研究
- 信号通路对细胞侵袭调控
- 原代细胞/类器官侵袭行为评价
- 肿瘤干细胞与微环境侵袭研究
⭐ 服务优势
- 模拟体内环境：Matrigel模拟基底膜屏障
- 高相关性：与体内转移能力高度相关
- 可定量：底部膜面染色细胞计数
- 兼容药物评价：评估抗侵袭药物效果
🔄 服务流程
- Transwell小室预铺Matrigel（1mg/mL，50uL/孔）
- 37C凝固2h，无血清培养基水化
- 上室接种细胞（无血清培养基）
- 下室加入含10%FBS培养基（趋化）
- 培养24-48h
- 擦去上室细胞，底部固定染色
- 显微镜下计数穿越细胞数
📋 服务详情 / 客户提供
| 项目 | 要求 |
|---|---|
| 细胞系 | 指定肿瘤细胞系名称及侵袭能力 |
| 处理条件 | 药物/基因修饰方案及对照 |
| Matrigel浓度 | 常规1mg/mL可调整 |
| 时间节点 | 24h/48h侵袭时间 |
📊 结果展示
侵袭图片（结晶紫染色/荧光）、穿越细胞数统计柱状图、实验报告。
📦 最终交付
侵袭图片（结晶紫染色/荧光）、穿越细胞数统计柱状图、实验报告。
Q: Matrigel包被厚度对结果有何影响
过少（<50ug/孔）屏障不足，过大（>100ug/孔）细胞难穿越导致假阴性。推荐50-100ug/孔，均匀铺布避免气泡。
Q: 侵袭和迁移实验如何选择
迁移检测运动能力（无Matrigel）；侵袭检测降解基质并穿越能力（有Matrigel）。肿瘤转移研究建议两者都做。
Q: Matrigel铺胶注意事项
Matrigel需4°C过夜缓慢解冻（切勿37°C/手温解冻），全程冰上操作防止凝固。用预冷枪头和孔板。稀释Matrigel至1mg/mL（用无血清培养基），加50-100μL/孔至Transwell上室膜上，37°C凝固30-60min。铺胶后检查无气泡、均匀覆盖膜面。
Q: 侵袭实验穿膜细胞极少怎么办
1)增加细胞数(5-10万/孔)；2)延长培养时间(48-72h)；3)检查Matrigel浓度是否过高(100μg/孔合适)；4)确认细胞MMP表达（可预先检测MMP-2/9）；5)下室加10% FBS趋化；6)细胞状态良好(对数生长期)；7)检查膜孔径(8μm)。
Q: 侵袭实验需要多少Matrigel
每孔(24-well, 8μm膜, 面积0.33cm²)使用50-100μg Matrigel。Matrigel浓度1mg/mL，加50-100μL/孔即可。浓度过高（>200μg）细胞难以穿透；过低（<25μg）失去屏障作用。建议Matrigel稀释后分装-80°C保存，避免反复冻融。
Q: 侵袭和迁移怎么做对照设计
每批实验设：1)迁移对照(无Matrigel的Transwell)；2)侵袭实验(有Matrigel的Transwell)；3)阴性对照(无趋化因子—下室无血清培养基)；4)阳性对照(10% FBS下室)。侵袭率/迁移率比值反映细胞降解基底膜能力。
Q: 药物处理侵袭实验怎么设计
1)预孵育：细胞加药物处理24h后消化接种Transwell(看药物对侵袭能力影响)；2)共孵育：接种同时加药物至Transwell上下室(看药物是否直接抑制侵袭)；3)不同浓度梯度。建议设溶剂对照(0.1% DMSO)。MMP抑制剂GM6001(10μM)可作为阳性对照。
Q: 侵袭结果如何定量
结晶紫或DAPI染色后：1)棉签擦上室细胞→下室面染色→33%醋酸洗脱570nm测OD；2)荧光显微镜5个随机视野计数穿膜细胞。侵袭率=穿膜细胞数/接种细胞数×100%。比较迁移(无Matrigel)和侵袭(有Matrigel)比值。