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RNA印迹杂交
📝 服务介绍
Northern Blot通过变性凝胶电泳分离RNA、转膜后与标记探针杂交，检测特定mRNA或非编码RNA的大小和表达水平，在RNA大小鉴定、可变剪接分析等场景仍具有不可替代的价值。
🔬 实验原理
Northern Blot原理：RNA经变性琼脂糖凝胶电泳分离后转移到尼龙膜上，用标记探针杂交检测特定RNA转录本的大小和丰度。可直接分析RNA剪接变异体、转录本大小和相对表达水平，是RNA分析的经典方法。
📋 应用领域
- 特定mRNA/lncRNA转录本检测与半定量
- 基因转录本大小与剪接变体分析
- miRNA/siRNA等小RNA表达验证
- 转基因/基因敲除后转录产物验证
- 病毒RNA基因组的检测
- 非编码RNA表达组织分布分析
⭐ 服务优势
- RNA大小鉴定：可直观判断转录本大小
- 剪接体分析：区分不同可变剪接变体
- 新型RNA验证：lncRNA/circRNA发现验证
- 兼容多种探针
🔄 服务流程
- RNA提取与变性（甲醛变性胶）
- 琼脂糖凝胶电泳分离RNA
- 毛细管转膜至尼龙膜
- 探针标记与杂交
- 洗膜、放射自显影或化学发光
📋 服务详情 / 客户提供
| 项目 | 要求 |
|---|---|
| RNA样品 | >=10ug总RNA，RIN>=7.0 |
| 探针序列 | 目的基因/非编码RNA序列 |
| 样本类型 | 细胞/组织/分离的mRNA等 |
| 检测方式 | 同位素/地高辛化学发光 |
📊 结果展示
交付杂交膜图像、RNA分子量marker及目的条带位置标注、实验报告。
📦 最终交付
交付杂交膜图像、RNA分子量marker及目的条带位置标注、实验报告。
Q: Northern Blot RNA降解严重怎么处理
全程RNase-free操作：DEPC水处理器皿、佩戴口罩、RIN>=7.0。若样品降解严重建议重新取样。
Q: circRNA Northern Blot探针如何设计
需设计跨环状化接头的探针（divergent primer扩增序列），确保特异性识别环化产物而非线性母本mRNA。
Q: Northern Blot怎么做
1)提取总RNA(5-20μg，DNase消化)；2)变性琼脂糖凝胶电泳(甲醛变性/MOPS buffer)；3)毛细管转移或电转至尼龙膜(过夜)；4)UV交联固定；5)预杂交(Church/ULTRAhyb buffer 68°C 2h)；6)探针杂交(标记RNA/DNA探针68°C过夜)；7)洗膜→放射自显影/化学发光检测。
Q: Northern Blot和RT-qPCR区别
Northern Blot：检测RNA大小和丰度，可发现不同剪接体/转录本变异，不需PCR(无偏倚)，但灵敏度低(需μg级RNA)、耗时长(2-3天)。RT-qPCR：高灵敏度高通量但需逆转录+PCR扩增(可能有偏倚)，只能检测已知序列(设计引物)，不能看RNA大小。RNA大小/剪接体分析选Northern，定量选RT-qPCR。
Q: Northern Blot探针怎么选
1)DNA探针：随机引物标记P32/DIG，300-1000bp特异性好；2)RNA探针(riboprobe)：体外转录标记，RNA-RNA杂交更稳定(Tm高10°C)，适合低丰度RNA；3)寡核苷酸探针：20-50nt，可检测特定剪接外显子。建议RNA探针(灵敏度高)。探针需跨过靶mRNA保守区域避免脱靶。
Q: Northern Blot能检测什么
1)mRNA大小和丰度(不同组织/处理表达差异)；2)选择性剪接体检测(不同大小条带)；3)非编码RNA(lncRNA/snoRNA)大小和表达；4)RNA降解评估(28S/18S比值)；5)病毒RNA检测；6)miRNA检测(用尿素-PAGE胶分离小RNA)。需高质量完整RNA(RIN>7)。
Q: Northern Blot RNA降解怎么办
1)全程RNase-free操作(DEPC水/RNase清除剂/手套更换)；2)RNA提取后立即电泳或-80°C保存(避免反复冻融)；3)甲醛变性胶(2.2M甲醛)防止RNA二级结构影响迁移；4)电泳后检查28S/18S rRNA条带(28S:18S≈2:1为完整RNA)；5)RNA降解(28S<18S)需重新提取。建议用RNA later保存组织。