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酶联免疫吸附测定
📝 服务介绍
ELISA利用抗原-抗体特异性结合原理，通过酶标仪读取显色信号定量检测样本中目标蛋白浓度。具有高通量、高灵敏度、操作标准化等优势，是免疫学检测和药物筛选的经典方法。
🔬 实验原理
ELISA原理：将抗原或抗体包被微孔板，通过特异性免疫反应和酶标记检测，底物显色后用酶标仪读取OD值。四种模式：直接法、间接法、夹心法（双抗）、竞争法。标准曲线定量分析靶分子浓度。
📋 应用领域
- 细胞因子/趋化因子浓度定量
- 抗体效价滴度检测
- 血清/血浆中生物标志物浓度测定
- 激素/神经递质水平检测
- 疫苗免疫应答与抗原检测
- 炎症/免疫相关指标定量分析
⭐ 服务优势
- 高通量：96/384孔板批量检测
- 高灵敏：pg/mL级别检测限
- 标准曲线定量：R2>0.99确保准确
- 多类型检测：夹心法/间接法/竞争法
🔄 服务流程
- 样本收集与处理
- 试剂准备：标准品梯度稀释
- 加样孵育：标准品/样本->检测抗体->HRP二抗
- TMB底物显色，硫酸终止
- 酶标仪450nm读取OD值
- 四参数拟合标准曲线计算浓度
📋 服务详情 / 客户提供
| 项目 | 要求 |
|---|---|
| 样本类型与数量 | 血清/血浆/细胞上清/组织匀浆等 |
| 目标检测物 | 细胞因子/激素/信号分子名称 |
| 样本体积 | 每孔>=100uL，建议提供>=200uL |
| 处理条件 | 如需刺激/给药请说明 |
📊 结果展示
交付标准曲线图、样本浓度计算表（含均值+/-SD）、统计分析结果及实验报告。
📦 最终交付
交付标准曲线图、样本浓度计算表（含均值+/-SD）、统计分析结果及实验报告。
Q: 样本浓度超出标准曲线范围怎么处理
若OD值高于最高标准点，需稀释后重新检测；若低于最低标准点，需浓缩样本或换用高敏ELISA试剂盒。建议正式实验前先做预实验。
Q: ELISA批间差异大如何改善
确保样本一次性冻融、每板设复孔（>=2）、标准品现配现用、同一批次试剂操作、加样手法一致避免气泡。
Q: 标准曲线R²低怎么办
检查标准品稀释是否准确、倍比稀释是否均匀、洗涤是否充分、温育时间/温度是否一致。建议做复孔，剔除异常值。R²应>0.99。使用四参数逻辑回归拟合（4PL）比线性拟合更准确。
Q: 背景信号高怎么降低
增加洗涤次数（5次×300μL/孔）、优化封闭液（1-3%BSA或脱脂奶粉）、降低二抗浓度、缩短底物反应时间、避免气泡。空白孔OD应<0.1。使用Tween-20(0.05%)增强洗涤效果。
Q: 样本OD值超出标准曲线范围怎么办
高浓度样本需稀释后重新检测（稀释比需记录用于计算）。低浓度样本可减少稀释比或增加上样体积。切勿外推标准曲线范围。建议预实验确定合适稀释比。
Q: 夹心法和间接法怎么选
夹心法（双抗）特异性和灵敏度高，适合复杂样品（血清/细胞上清），需配对抗体对。间接法简单快速，适合抗体效价检测和筛选。定量检测选夹心法，抗体筛选选间接法。
Q: 血清/血浆样本收集注意事项
血清：采血后室温静置30-60min凝血，3000g离心10min取上清。血浆：采血管加抗凝剂（EDTA/肝素），3000g离心10min。避免溶血（红细胞破裂释放Hb干扰检测）。分装-80°C保存，避免反复冻融。
Q: ELISA和MSD/Luminex有什么区别
ELISA单指标检测，通量低但成本低。MSD（Meso Scale Discovery）使用电化学发光，灵敏度更高、动态范围更宽。Luminex基于微球可同时检测多指标（多重检测），适合小体积多样本。多指标选Luminex，高灵敏度选MSD。