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表面等离子体共振
📝 服务介绍
SPR利用传感器表面固定配体，实时检测分析物流过表面时引起的折射率变化，实现无标记、实时、动力学水平的分子互作分析，测定Kon/Koff/KD等结合参数。
🔬 实验原理
SPR原理：表面等离子体共振技术。一个分子固定在传感器芯片表面，另一分子流过表面，结合/解离导致芯片表面折射率变化，实时检测分子互作动力学(kon/koff)和亲和力(KD)，无需标记。
📋 应用领域
- 蛋白-蛋白/蛋白-肽/蛋白-小分子结合动力学
- 实时无标记亲和力测定(KD/ka/kd)
- 抗体-抗原结合亲和力评价
- 药物-靶点结合分析
- 构象变化诱导的结合差异
- 竞争结合实验与表位分析
⭐ 服务优势
- 无标记检测：无需荧光标记
- 实时动力学：Kon/Koff/KD全面参数
- 高灵敏度：nM-pM检测范围
- 高通量：Biacore 8K可实现384样本/批次
🔄 服务流程
- 传感器芯片固定配体（氨基偶联/捕获）
- 分析物梯度浓度流过表面
- 实时记录结合和解离曲线
- 参比通道扣除背景
- 1:1 Langmuir模型拟合
- 输出Kon/Koff/KD/Rmax
📋 服务详情 / 客户提供
| 项目 | 要求 |
|---|---|
| 配体 | 固定在芯片上的分子（蛋白/核酸/小分子） |
| 分析物 | 流动相分子（蛋白/小分子/抗体/核酸） |
| 缓冲液 | HBS-EP+或指定 |
| 分析模式 | 动力学分析/亲和力测定/竞争结合 |
| 样品量 | 配体>=50ug 分析物>=100ug |
📊 结果展示
SPR传感图（结合/解离曲线）、KD/Kon/Koff动力学参数表、拟合曲线及实验报告。
📦 最终交付
SPR传感图（结合/解离曲线）、KD/Kon/Koff动力学参数表、拟合曲线及实验报告。
Q: SPR固定配体活性低怎么办
确认偶联pH（氨基偶联pH4.0-5.0使配体预富集）、固定密度适中（太高导致传质限制和空间位阻）、使用捕获方式（His-tag Ni-NTA/anti-His）保留天然构象。
Q: SPR出现非特异结合怎么办
增加洗涤中NaCl浓度（150-500mM）或Tween-20（0.005-0.05%）、参比通道固定等量BSA或无关蛋白、再生条件优化（Glycine pH2.5/NaOH脉冲）。
Q: SPR和BLI有什么区别
SPR：流式系统，样品流过芯片表面，检测折射率变化，有缓冲液流动可精确控制浓度梯度，数据质量高但耗样多。BLI：浸入式，探针浸入样品孔，检测光干涉信号，不需流路系统耗样少但精度略低。高通量筛选选BLI，精确定量选SPR。两者互补。
Q: SPR固定方式有哪些
1)氨基偶联(EDC/NHS共价固定，最常用但可能影响活性位点)；2)His-tag捕获(Ni-NTA/抗His抗体芯片捕获His标签蛋白)；3)Biotin-Streptavidin(生物素标记→SA芯片捕获，定向固定)；4)抗体捕获(一抗捕获特定蛋白方向固定)。建议His-tag/抗体捕获(定向固定保留活性)。
Q: SPR能检测什么参数
1)结合(kon/on-rate)；2)解离(koff/off-rate)；3)平衡解离常数(KD=koff/kon，亲和力)；4)结合容量(Rmax)；5)特异性(竞争结合实验)；6)动力学曲线拟合(1:1 Langmuir/二价/构象变化模型)。KD范围pM-mM。是小分子-蛋白/蛋白-蛋白互作定量金标准。
Q: SPR需要多少样品
固定蛋白：5-50μg(氨基偶联)或1-5μg(His-tag捕获)。流动相分析物：10-1000nM浓度梯度(5-8个浓度)×50-100μL/浓度。总蛋白量约100-500μg。小分子分析需更高浓度(μM范围)。需高纯度蛋白(>95%)和缓冲液过滤脱气。建议做预实验确定浓度范围。
Q: SPR和非标记检测优势
SPR无需荧光/同位素标记，检测的是物理光学信号，不干扰分子天然构象，可检测低亲和力/瞬态互作(kon>10⁵ M⁻¹s⁻¹)。支持小分子(分子量<500Da)检测。但需纯化蛋白且固定可能影响活性。均相溶液方法(ITC/MST)不需固定但需更多样品。