组织块必须切成1mm3小块（不超过1mm3），确保锇酸充分渗透固定。取材后30min内入固定液，4C固定2-24h。

自噬体特征：双层膜结构包裹细胞器/胞质成分。建议计数自噬体数量/细胞作为量化指标，结合LC3-II Western Blot验证。

1)2.5%戊二醛+1%锇酸双重固定；2)梯度乙醇脱水；3)环氧树脂包埋(Epon812)；4)超薄切片机切50-80nm；5)醋酸铀+柠檬酸铅双重染色。关键：固定充分、包埋均匀、切片无皱褶、染色适度。需经验丰富技术人员操作。

线粒体(嵴/膜/基质)、内质网(粗面/光面)、高尔基体(扁平囊/小泡)、溶酶体(初级/次级)、自噬体(双膜)、核(染色质/核仁/核孔)、核糖体、过氧化物酶体、微丝/微管。病理变化：线粒体肿胀/空泡化、内质网扩张、核固缩等。

TEM：需超薄切片(50-80nm)，双固定+树脂包埋+铀铅染色，观察内部结构。SEM：需表面暴露，双固定+脱水+干燥+导电层，观察表面形貌。TEM样品需浸透包埋切薄，SEM样品需保持完整表面干燥。

自噬体：双膜或多膜包裹的囊泡结构，内含胞质/细胞器，直径0.5-2μm。自噬溶酶体：单膜，内含降解物(电子密度不均)。计数：每细胞截面自噬体数。需计数≥50细胞。配合LC3-IHC/WB验证。注意区分自噬体和多泡体。

细胞：10⁶-10⁷细胞沉淀(离心后绿豆大小)。组织：1mm³组织块3-5块(不同部位取材)。固定必须在取材后立即进行(4°C 2.5%戊二醛2h)。样品量少时可增加包埋块数。取材需快(活体组织离体后1min内固定)。