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荧光原位杂交
📝 服务介绍
FISH利用荧光标记的核酸探针与组织/细胞中靶核酸序列杂交，通过荧光信号检测基因扩增、缺失、易位等染色体异常，是病理诊断和基因组分析的重要手段。
🔬 实验原理
FISH原理：荧光原位杂交利用荧光标记的DNA/RNA探针与细胞/组织切片中的靶核酸序列互补配对杂交，通过荧光显微镜检测信号位置和数量，实现基因定位、染色体畸变、基因扩增和融合基因检测。
📋 应用领域
- 染色体数目与结构异常检测
- 融合基因/基因重排检测
- 基因扩增（HER2等）
- 非整倍体检测与产前诊断
- 肿瘤染色体畸变分析
- 特定序列定位/拷贝可视化
⭐ 服务优势
- 高特异性：探针精准互补结合
- 单细胞水平：检测单个细胞内基因组变异
- 多重检测：不同颜色探针同时检测多靶标
- 兼容组织/细胞
🔄 服务流程
- 样本制备（细胞滴片/组织切片）
- 老化（37C过夜）
- 变性（73C 5min）
- 探针变性（75C 5min）
- 杂交（37C过夜16h）
- 洗涤（SSC梯度）
- DAPI复染
- 封片观察
📋 服务详情 / 客户提供
| 项目 | 要求 |
|---|---|
| 样本类型 | 细胞滴片/石蜡切片/冰冻切片 |
| 探针信息 | 探针类型（着丝粒/位点特异性/涂染探针）或委托设计 |
| 靶基因/位点 | 检测的基因/染色体区域 |
| 检测目的 | 扩增/缺失/易位/融合 |
📊 结果展示
荧光图片（含DAPI和探针信号）、信号计数统计表、实验报告。
📦 最终交付
荧光图片（含DAPI和探针信号）、信号计数统计表、实验报告。
Q: FISH杂交信号弱怎么优化
确认探针浓度（推荐5-10ng/uL）、变性温度和时间准确（温度偏低导致探针和靶DNA未充分变性）、杂交时间充足（16-20h）。增加洗涤严格性去除非特异结合。
Q: 石蜡切片FISH成功率低怎么办
使用蛋白酶K消化（20ug/mL 37C 20min）增加探针渗透；切片厚度3-4um避免信号叠加；选择高质量固定组织（4%多聚甲醛<24h）。
Q: FISH探针类型怎么选
着丝粒探针：检测染色体数目异常(如三体/单体)。位点特异性探针(LSI)：检测基因缺失/易位/扩增(如HER2扩增)。全染色体涂抹探针(WCP)：识别整条染色体。断裂点分离探针：检测融合基因(如BCR-ABL)。根据研究目的选择。
Q: FISH信号弱怎么办
1)探针浓度不足(增加杂交探针量)；2)杂交温度不合适(37-42°C过夜)；3)变性温度不够(73°C 5min)；4)洗涤不严格(提高洗涤温度/降低盐浓度)；5)探针降解(分装-80°C避免反复冻融)；6)信号放大(TSA-Cy3系统)。
Q: FISH和IHC怎么选
FISH检测DNA/RNA水平(基因扩增/缺失/融合/染色体异常)，IHC检测蛋白水平。FISH是DNA层面金标准(如HER2扩增)，IHC是蛋白层面初筛。临床HER2检测：先IHC初筛(0/1+阴性,3+阳性)，2+做FISH确认。
Q: FISH背景高怎么办
1)增加洗涤严格度(提高温度/降低盐浓度)；2)降低探针浓度；3)杂交后RNase处理(去非特异RNA结合)；4)增加封闭(Cot-1 DNA抑制重复序列)；5)优化变性时间(过长导致形态差+背景高)。
Q: 如何判读FISH结果
计数至少50-100个核信号。HER2/CEP17比值>2.0或平均HER2拷贝数≥6.0=扩增。比值1.8-2.2为临界值需重复检测。注意异质性(部分细胞扩增)。计数时排除重叠核和无信号核。需两位观察者独立计数。