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荧光共振能量转移
📝 服务介绍
FRET利用供体荧光蛋白（如CFP）发射光谱与受体荧光蛋白（如YFP）激发光谱重叠时发生非辐射能量转移，当两个融合蛋白距离<10nm时检测到受体荧光增强，在活细胞中检测蛋白互作和构象变化。
🔬 实验原理
FRET原理：荧光共振能量转移。两个荧光基团(供体Donor/受体Acceptor)距离<10nm且光谱重叠时，供体激发能量非辐射转移至受体，导致供体荧光减弱和受体荧光增强。FRET效率反映分子间距离和互作。
📋 应用领域
- 活细胞内蛋白互作距离与动力学检测
- FRET效率定量反映结合状态
- 荧光共振能量转移实时监测
- 构象变化与互作动态研究
- 信号转导早期事件检测
- 药物处理后互作扰动分析
⭐ 服务优势
- 实时动态：活细胞互作动态监测
- 距离敏感：<10nm分辨率远超光学极限
- 可定量：FRET效率反映距离变化
- 兼容多重：可同时监测多对互作
🔄 服务流程
- 构建CFP-蛋白A + YFP-蛋白B融合载体
- 共转染细胞
- 荧光显微镜采集CFP/YFP通道
- FRET计算（ sensitized emission或acceptor photobleaching）
- 定量FRET效率
- 对照：供体单独表达/受体单独表达/阳性质控
📋 服务详情 / 客户提供
| 项目 | 要求 |
|---|---|
| 蛋白A序列 | CDS序列 |
| 蛋白B序列 | CDS序列 |
| 荧光蛋白对 | CFP-YFP/mTurquoise-mVenus/mCherry-GFP等 |
| 细胞系 | 指定细胞系 |
| 检测方式 | 荧光显微/共聚焦/FLIM-FRET |
📊 结果展示
FRET图像（伪彩FRET效率图）、FRET效率统计图、实验报告。
📦 最终交付
FRET图像（伪彩FRET效率图）、FRET效率统计图、实验报告。
Q: FRET信号弱如何优化
确认供体受体光谱匹配、表达量平衡（避免受体过度）、sensitized emission扣除串扰、acceptor photobleaching确认FRET（漂白受体后供体荧光增强）。FLIM-FRET最准确不受浓度影响。
Q: FRET和BiFC如何选择
FRET检测实时动态互作（可逆）、距离<10nm；BiFC检测累计互作（不可逆、灵敏度更高）。研究动态构象变化选FRET，检测瞬时弱互作选BiFC。
Q: FRET怎么做实验
1)构建融合蛋白(CFP-蛋白A + YFP-蛋白B)；2)共转染细胞；3)检测：供体激发(433nm)→同时检测CFP(475nm)和YFP(525nm)荧光；4)FRET效率=(1-F_DA/F_D)×100%。FRET阳性：加受体后供体荧光减弱(猝灭)+受体荧光增强(敏化发射)。需设CFP-A单独(供体对照)和YFP-B单独(受体对照)。
Q: FRET和BiFC怎么选
FRET：可逆实时、可测距离(0-10nm)、需荧光基团靠近且方向匹配、但信号弱需灵敏仪器。BiFC：不可逆累积信号、灵敏度高适合低丰度互作、但无动力学信息且假阳性多。实时动态互作选FRET，低丰度互作检测选BiFC。两者配合：BiFC初筛→FRET验证动力学。
Q: FRET检测方法有哪些
1)敏化发射法(Sensitized Emission)：测受体增强信号，适合常规显微镜；2)受体光漂白法(Acceptor Photobleaching)：漂白受体后供体荧光增强，简便但不可逆；3)荧光寿命成像(FLIM)：测供体荧光寿命缩短，最精确但需特殊设备。建议受体光漂白法(简便)或FLIM(精确)。
Q: FRET效率多少算阳性
FRET效率E>5-10%为阳性(取决于系统灵敏度)。受体光漂白法：FRET效率=(F_D_after - F_D_before)/F_D_after×100%。需设对照：1)仅供体(无受体)漂白不变化；2)仅受体(无供体)无FRET；3)已知FRET阳性对(如Cerulean-Venus融合)。每组≥20细胞。
Q: FRET对荧光蛋白选择
CFP-YFP(经典对，Ex433/Em475&525)、mTurquoise-mVenus(L4)(改进CFP-YFP对信噪比高)、mCherry-GFP(Ex488/Em525&600)、Clover-mRuby2(亮)。注意：1)光谱重叠大(供体发射光谱与受体激发光谱重叠)；2)亮度高；3)单体(不聚集)。建议mTurquoise2-mVenus(L5)。