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细胞能量代谢实时分析
📝 服务介绍
Seahorse分析仪通过实时检测细胞培养上清中氧气消耗率（OCR）和胞外酸化率（ECAR），分别反映线粒体有氧呼吸和糖酵解水平，是代谢重编程研究的核心技术。
🔬 实验原理
Seahorse能量代谢分析原理：Seahorse分析仪实时检测活细胞耗氧率(OCR，反映线粒体呼吸)和胞外酸化率(ECAR，反映糖酵解)。通过依次加入线粒体应激测试药物(寡霉素/FCCP/鱼藤酮+抗霉素A)分析基础呼吸/ATP产生/最大呼吸/备用呼吸/非线粒体呼吸等参数。
📋 应用领域
- 细胞有氧呼吸与糖酵解实时测定
- OCR/ECAR代谢表型分析
- 线粒体氧化磷酸化功能评价
- 代谢重编程（瓦伯格效应）研究
- 药物对能量代谢途径的影响
- 代谢与疾病（肿瘤/糖尿病）关联研究
⭐ 服务优势
- 实时检测：每5-15min读取OCR/ECAR
- 双参数：线粒体呼吸+糖酵解
- 标准化分析：归一化至细胞数/蛋白量
- 药敏评估：评估代谢类药物作用机制
🔄 服务流程
- 细胞接种Seahorse专用微孔板
- 培养至合适密度（80-90%汇合）
- 更换无糖检测培养基
- 校准探针板
- 上机运行检测程序（基础呼吸->药物注射->各阶段OCR/ECAR）
- 测定后细胞计数归一化
📋 服务详情 / 客户提供
| 项目 | 要求 |
|---|---|
| 细胞系 | 指定细胞系名称（贴壁细胞优先） |
| 检测方案 | Mito Stress Test/Glyco Stress Test/两者 |
| 处理条件 | 药物/基因修饰方案及对照 |
| 细胞数 | 建议1-5x10^4/孔 |
📊 结果展示
OCR/ECAR实时曲线图、关键参数柱状图（基础呼吸/ATP产生/最大呼吸等）、实验报告。
📦 最终交付
OCR/ECAR实时曲线图、关键参数柱状图（基础呼吸/ATP产生/最大呼吸等）、实验报告。
Q: Seahorse检测OCR值偏低怎么优化
检查细胞密度是否够（80-90%汇合）、培养基是否含碳酸氢钠/HEPES（干扰pH检测）、探针板是否充分水化。建议做预实验确定最佳密度。
Q: 如何区分线粒体和糖酵解来源的酸化
Mito Stress Test依次注射Oligomycin/FCCP/Rotenone+Antimycin A，通过OCR变化区分线粒体各功能参数。
Q: Seahorse检测什么参数
OCR(耗氧率)：1)基础呼吸(基线OCR-非线粒体OCR)；2)ATP产生(基础-寡霉素后OCR)；3)最大呼吸(FCCP后OCR-非线粒体OCR)；4)备用呼吸能力(最大-基础呼吸)；5)非线粒体呼吸(鱼藤酮+抗霉素后OCR)。ECAR(胞外酸化率)：1)基础糖酵解；2)糖酵解能力(寡霉素后ECAR-基础)；3)糖酵解备用能力(糖酵解能力-基础)。
Q: Seahorse实验怎么做
1)XF96/XFe96板铺细胞(1-5×10^4/孔)过夜贴壁；2)换无糖培养基(Seahorse XF Base+谷氨酰胺)37°C无CO2 1h；3)药物孔装载：寡霉素(1μM)/FCCP(1-2μM)/鱼藤酮+抗霉素A(0.5μM)；4)上机：基线3循环→加药→各3循环→结束；5)数据用Wave软件分析。全程约1.5-2h。设培养基空白孔校正。
Q: Seahorse细胞密度怎么优化
1)预实验：每孔5×10^3/1×10^4/2×10^4/5×10^4铺板→测基线OCR和ECAR→选线性范围内的最佳密度；2)密度过低(OCR低信号弱)；3)密度过高(底物耗尽最大呼吸无法检测FCCP不增加)。建议预实验确定最佳密度。贴壁细胞用CellTaker覆盖底部；悬浮细胞用Cell-Tak(Poly-D-lysine)包被。
Q: Seahorse药物浓度怎么选
1)寡霉素(1μM阻断ATP合成)；2)FCCP(0.5-2μM解偶联，浓度需优化——太低不充分，太高有毒性)；3)鱼藤酮(0.5μM抑制复合体I)+抗霉素A(0.5μM抑制复合体III)。FCCP浓度是关键变量，建议预实验做浓度梯度(0.5/1/2/5μM)选OCR最大的浓度。某些细胞(如原代神经元)对FCCP敏感，浓度需降低。
Q: Seahorse能做什么研究
1)药物对代谢的影响(化疗药/代谢抑制剂)；2)基因敲除/过表达代谢表型(如LDHA敲除→糖酵解降低)；3)肿瘤代谢重编程(Warburg效应：糖酵解增高)；4)免疫细胞代谢(T细胞活化后代谢转换)；5)线粒体疾病模型(呼吸链缺陷)；6)细胞命运调控(干细胞代谢重编程)。结合WB(代谢酶/转运蛋白)全面分析。