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多色流式分析与分选
📝 服务介绍
流式细胞术利用激光激发荧光抗体标记的细胞，通过检测散射光和荧光信号实现细胞表型分析、周期检测、凋亡检测、免疫分型等。支持4-17色同时检测，并可进行流式分选（FACS）。
🔬 实验原理
流式细胞术原理：流式细胞术将悬浮细胞单列流过激光束，每个细胞经过激光时产生散射光(FSC/SSC反映细胞大小/颗粒度)和荧光信号(多个荧光通道检测不同标记)，可同时检测每秒数千个细胞的多参数信息，用于免疫分型/细胞周期/凋亡/表面标志物分析。
📋 应用领域
- 免疫细胞亚群分析（T/B/NK）
- 细胞表面/胞内标志物检测
- 细胞周期与凋亡联合分析
- 细胞增殖(CFSE)示踪
- 造血干细胞/肿瘤干细胞免疫表型
- 细胞因子胞内染色与功能测定
⭐ 服务优势
- 多色检测：支持4-17色同时分析
- 高通量：每秒检测数千细胞
- 可分选：FACS分选纯度>95%
- 数据丰富：多种参数同步获取
🔄 服务流程
- 细胞收集与计数
- 荧光抗体标记（表面/胞内/核内）
- 洗涤后上机（设电压/补偿/门）
- 获取数据（FCS文件）
- FlowJo/Kaluza分析
- 输出结果：百分比/MFI/散点图
📋 服务详情 / 客户提供
| 项目 | 要求 |
|---|---|
| 细胞/组织样本 | 细胞悬液或需解离的组织样品 |
| 抗体信息 | 荧光抗体名称/克隆号/通道分配 |
| 检测目的 | 表型分析/周期/凋亡/分选等 |
| 对照要求 | FMO对照/同型对照/补偿管 |
📊 结果展示
流式散点图/直方图（含各门比例）、MFI数据、FCS原始数据文件及实验报告。
📦 最终交付
流式散点图/直方图（含各门比例）、MFI数据、FCS原始数据文件及实验报告。
Q: 多色流式荧光补偿怎么设置
使用单染管补偿：每种荧光各一管单标细胞或补偿微球。上机先收集单染管建立补偿矩阵，再用FMO对照准确设门。
Q: 流式分选对细胞活性有何影响
使用低速分选和适当喷嘴（100um）可提高活性。分选后立即收集在含血清/BSA的培养基中。建议分选前后做活率检测（PI/7-AAD）。
Q: 流式细胞术能检测什么
1)免疫分型(CD3/CD4/CD8/B220/NK等)；2)细胞周期(PI/DAPI DNA含量分析)；3)凋亡(Annexin V/PI)；4)细胞增殖(CFSE/EdU)；5)细胞因子胞内染色(固定+穿透+IFN-γ/IL-2/TNF-α)；6)表面受体/标志物；7)荧光蛋白表达(GFP/RFP)；8)钙离子流(Fluo-4)；9)细胞分选(FACS)。多色面板可达15-20色。
Q: 多色流式怎么设计面板
1)选择抗原和克隆(需验证抗体/荧光偶联)；2)荧光素分配：强抗原配弱荧光(避免过饱和)，弱抗原配强荧光(PE/APC)；3)光谱重叠：PE/APC(低重叠)，FITC/PE(高重叠需补偿)；4)死活鉴别(Live/Dead Fixable Aqua/Blue)；5)设FMO(Fluorescence Minus One)确定阳性阈值；6)设同型对照(IgG)或生物学对照(已知阳性/阴性细胞)。建议4-6色起步。
Q: 流式补偿怎么调节
1)单染管：每个荧光单染一个样本(如FITC单染/PE单染/APC单染)；2)空白管：未染色细胞设PMT电压和排除阈值；3)上机检测→调节补偿矩阵减去光谱重叠；4)新式流式(光谱流式)用算法自动分解荧光光谱不需手动补偿。补偿设置错误导致假阳性/假阴性。建议每次实验必设单染和空白管。
Q: 流式细胞分选怎么做
1)细胞悬液(1×10^6/mL含2%FBS/2mM EDTA)→过滤40μm→上机；2)设定分选参数(FSC/SSC排除碎片和双联体)；3)设门策略(FSC-A/SSC-A→FSC-H/FSC-W排除双联体→荧光阳性门)；4)分选模式(Single Cell分选纯度99%/Enrich模式速度快)；5)收集到含培养基的管中(4°C)。分选后细胞活力>80%。可分选到96孔板(单细胞克隆)或管中(分析/再培养)。
Q: 流式组织样本怎么准备
1)组织消化(酶消化/机械研磨)→70μm过滤→红细胞裂解(ACK buffer)；2)细胞浓度调至1-5×10^6/mL(PBS+2%FBS+2mM EDTA)；3)Fc受体阻断(CD16/32)→加抗体→4°C 30min避光→洗涤→上机。组织消化需注意：1)酶消化时间(胶原酶/Dispase 37°C 20-30min)；2)死活鉴别(消化后活力可能下降)；3)细胞浓度均匀(避免双联体)。