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热稳定性蛋白质组(TPP)
📝 服务介绍
热蛋白质组分析（TPP/Thermal Proteome Profiling）利用药物结合改变蛋白热稳定性的原理，通过多温度点加热-质谱定量，在全蛋白质组范围鉴定药物直接靶点。
🔬 实验原理
热蛋白质组分析(TPP)原理：热蛋白质组分析(Thermal Proteome Profiling, TPP/CETSA)利用蛋白质热变性特性：药物结合后蛋白热稳定性变化(Tm偏移)，通过多重温度梯度加热+定量质谱检测蛋白质热变性曲线，发现药物靶点和小分子-蛋白互作。
📋 应用领域
- 药物-靶点结合的热稳定性（CETSA/TPP）
- 无标记鉴定药物直接靶点
- 靶点占有率与结合热力学评价
- 药物脱靶效应识别
- 靶点功能蛋白组学验证
- 蛋白热稳定性图谱细胞全景
⭐ 服务优势
- 全蛋白质组靶点扫描
- 无需标记药物
- 体内直接靶点
- 兼容结合位点定位
🔄 服务流程
- 细胞/裂解液加药物处理
- 多温度点加热（37-67C 10个温度梯度）
- 可溶性蛋白分离离心
- TMT标记定量
- LC-MS/MS分析
- 热稳定性曲线拟合（药物vs对照）
- 靶点蛋白鉴定（稳定性变化）
📋 服务详情 / 客户提供
| 项目 | 要求 |
|---|---|
| 药物信息 | 药物名称/溶剂/浓度 |
| 样品 | 细胞或裂解液 |
| TPP模式 | 完整细胞TPP/裂解液TPP |
| 温度范围 | 37-67C 10个温度点 |
| 分析需求 | 靶点蛋白鉴定/结合位点推断 |
📊 结果展示
蛋白质热稳定性曲线图（ melting curve）、差异稳定性蛋白列表、药物靶点候选列表及实验报告。
📦 最终交付
蛋白质热稳定性曲线图（ melting curve）、差异稳定性蛋白列表、药物靶点候选列表及实验报告。
Q: TPP鉴定靶点的原理是什么
药物与蛋白直接结合会改变蛋白热稳定性（通常提高Tm值）。通过比较多温度点加热后可溶性蛋白的变化（药物vs对照），稳定性改变的蛋白为候选靶点。结合结合竞争实验可进一步验证。
Q: TPP能区分直接和间接靶点吗
完整细胞TPP检测药物进入细胞后影响的所有蛋白（直接+间接）；裂解液TPP仅检测直接结合靶点（无细胞膜屏障和信号级联）。两者结合可区分直接和间接靶点。使用溶剂对照消除非特异热稳定性变化。
Q: TPP怎么做
1)细胞/裂解液加药物(DMSO对照)处理；2)多重温度梯度加热(37-67°C，10个温度点)；3)离心去除变性沉淀蛋白(上清为可溶蛋白)；4)上清胰酶消化+TMT标记(10通道×2批次=10温度点)；5)LC-MS/MS定量各温度下可溶蛋白丰度；6)拟合热变性曲线→计算Tm(融化温度)→药物结合导致Tm偏移(ΔTm>2°C为显著)。需1-2mg蛋白/温度点。
Q: TPP和DARTS区别
TPP(Thermal Proteome Profiling)：加热变性+质谱定量，通过Tm偏移检测药物-蛋白互作，全蛋白质组覆盖(不需抗体)，但需大量蛋白(1-2mg/温度点)和TMT标记(成本高)。DARTS(Drug Affinity Responsive Target Stability)：蛋白酶降解+WB/质谱检测，药物结合保护靶蛋白不被蛋白酶降解。DARTS更简便(不需多温度梯度)但覆盖低。
Q: TPP能做什么
1)药物靶点发现(全蛋白质组筛选药物结合靶蛋白)；2)药物脱靶识别(解释药物副作用)；3)药物-蛋白互作定量(ΔTm与亲和力相关)；4)体内TPP(in-cell TPP：活细胞加药加热→裂解检测，保留生理条件)；5) CETSA(Western blot/荧光检测单个蛋白热稳定性，需抗体)。建议TPP全蛋白质组发现→CETSA WB验证。
Q: TPP需要多少蛋白
1-2mg蛋白/温度点×10温度点=10-20mg总蛋白/样本。TMT标记(10plex)可一次分析10个温度点。两批次(TMT 10plex×2)可覆盖完整热变性曲线。需高纯度蛋白(无去垢剂干扰)。in-cell TPP需10^7-10^8细胞/温度点。建议20mg总蛋白起始(10温度点+TMT标记)。可减少温度点(5个关键温度)降低成本。
Q: TPP数据分析怎么做
1)TMT定量各温度点蛋白丰度(归一化至37°C)；2)拟合热变性曲线(sigmoidal fit)计算Tm(50%变性温度)；3)比较DMSO vs 药物组的Tm差异(ΔTm)；4)ΔTm>2°C且p<0.05为显著靶点；5)火山图(ΔTm vs p-value)筛选靶点；6)GO/KEGG富集(靶点功能/通路)。可用TPP-TR(温度范围)或TPP-CCR(化合物浓度梯度)两种策略。