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分泌蛋白质组学
📝 服务介绍
分泌组分析收集细胞条件培养基（CM），通过超滤浓缩和质谱鉴定分泌蛋白/外泌体蛋白/胞外囊泡蛋白，研究细胞间通讯、旁分泌信号和液体活检标志物。
🔬 实验原理
分泌蛋白质组原理：分泌蛋白质组(Secretome)分析细胞分泌到培养基中的蛋白质。通过收集无血清或低血清条件培养基，浓缩/超滤/离心后LC-MS/MS分析分泌蛋白。分泌蛋白包括细胞因子/趋化因子/生长因子/蛋白酶/外泌体蛋白，是细胞间通讯和疾病标志物的重要来源。
📋 应用领域
- 分泌蛋白组鉴定与定量
- 细胞分泌蛋白谱概览
- 外泌体/条件培养基蛋白分析
- 分泌蛋白与细胞间通讯
- 肿瘤分泌组与肿瘤微环境
- 分泌性生物标志物发现
⭐ 服务优势
- 无创采样：体液/培养基
- 通讯蛋白：揭示旁分泌信号
- 标志物发现：液体活检应用
- 兼容外泌体分析
🔄 服务流程
- 无血清培养基培养细胞24-48h
- 条件培养基收集离心去除细胞
- 超滤浓缩（3kDa MWCO）或TCA/丙酮沉淀
- 外泌体分离（超速离心/SIZE排阻，如需）
- LC-MS/MS分析
- 分泌蛋白鉴定和信号通路分析
📋 服务详情 / 客户提供
| 项目 | 要求 |
|---|---|
| 细胞系 | 指定细胞系（需无血清培养适应） |
| 培养条件 | 无血清培养基培养时间 |
| 检测对象 | 总分泌蛋白/外泌体蛋白/胞外囊泡 |
| 样本数量 | >=2组 每组>=3重复 |
| 分析需求 | 分泌蛋白鉴定/信号通路/标志物筛选 |
📊 结果展示
分泌蛋白列表、信号通路富集分析、外泌体标志物鉴定（如需）及实验报告。
📦 最终交付
分泌蛋白列表、信号通路富集分析、外泌体标志物鉴定（如需）及实验报告。
Q: 无血清培养导致细胞死亡怎么办
逐步适应血清饥饿（24h换无血清前先12h换低血清0.5% FBS）、使用B27添加剂替代血清、确认细胞汇合度（80-90%再换无血清）、缩短培养时间（12-24h）。
Q: 分泌组中外泌体蛋白和游离蛋白如何区分
超速离心100,000g 70min沉淀外泌体，上清为游离蛋白。分别做质谱鉴定。外泌体标志物：CD9/CD63/CD81/Alix/TSG101。建议用NTA/TEM确认外泌体。
Q: 分泌蛋白质组怎么做
1)细胞培养至70-80%汇合→换无血清培养基(或Serum-free替代品)培养24-48h(避免血清蛋白干扰)；2)收集条件培养基(CM)→离心300g去细胞→2000g去碎片→10000g去外泌体(或保留外泌体)；3)超滤浓缩(3kDa MWCO Amicon)→胰酶消化→LC-MS/MS；4)搜库鉴定分泌蛋白。建议1-5×10^7细胞收集5-10mL CM。
Q: 分泌蛋白质组需要无血清培养
血清含大量蛋白(白蛋白10mg/mL)严重干扰分泌蛋白检测(血清蛋白占99%+分泌蛋白<1%)。方法：1)无血清培养基(Opti-MEM/DMEM无FBS)培养24-48h；2)或Serum-free supplement(SFM替代品减少细胞应激)；3)或去除血清蛋白(纳米膜/免疫去除白蛋白/IgG)。注意：无血清培养可能影响细胞活力和分泌。
Q: 分泌蛋白质组和外泌体区别
分泌蛋白质组(总分泌蛋白)：包含可溶性分泌蛋白(细胞因子/蛋白酶)+外泌体蛋白。外泌体蛋白质组：纯化外泌体(100,000g离心/SEC/密度梯度)后分析外泌体内蛋白(CD9/CD63/CD81/TSG101/Alix)。总分泌蛋白质组覆盖更广(所有分泌蛋白)，外泌体蛋白质组更特异(外泌体标记蛋白)。建议先做总分泌蛋白质组再分析外泌体。
Q: 分泌蛋白质组能做什么
1)细胞因子/趋化因子分析(炎症/免疫通讯)；2)肿瘤标志物(分泌蛋白是液体活检来源)；3)药物毒性评价(肝细胞分泌ALT/AST)；4)细胞间通讯(共培养CM分析分泌组)；5)干细胞旁分泌(MSC分泌因子)。SignalP/SecretomeP预测分泌信号肽。整合分泌蛋白质组+转录组(分泌mRNA与蛋白关联)。
Q: 分泌蛋白质组样本怎么准备
1)细胞：1-5×10^7细胞在无血清培养基中培养24-48h；2)条件培养基(CM)：离心去细胞碎片→超滤浓缩(3kDa MWCO)→蛋白定量(BCA)；3)蛋白量：10-100μg浓缩蛋白(从5-10mL CM浓缩)；4)避免血清干扰(无血清培养或血清蛋白去除)；5)避免死细胞释放蛋白(活力>90%且无血清时间<48h)。建议设无细胞对照(空白培养基)扣除培养基蛋白。