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双分子荧光互补
📝 服务介绍
BiFC将荧光蛋白（如GFP/YFP）分为N端和C端两个片段分别融合到两个互作蛋白上，当两蛋白互作时荧光蛋白片段互补恢复荧光，可直接在活细胞中观察蛋白互作的位置和时间。
🔬 实验原理
BiFC原理：双分子荧光互补技术。将荧光蛋白(如GFP/YFP)分为N端和C端两片段，分别融合两个待测蛋白。当两蛋白互作时荧光蛋白片段靠近并重组为完整荧光蛋白，发出荧光。可在活细胞中直接观察蛋白互作的位置和强度。
📋 应用领域
- 活细胞内蛋白-蛋白互作可视验证
- 拆分荧光蛋白互补法检测互作位点
- 动态互作/瞬时互作检测
- 亚细胞定位与互作同时分析
- 通路蛋白互作网络体内验证
- 药物干预对互作的影响
⭐ 服务优势
- 活细胞检测：直观观察互作
- 亚细胞定位：互作发生位置可见
- 无抗体检测：荧光信号直接读取
- 兼容多种荧光蛋白：GFP/YFP/mCherry
🔄 服务流程
- 构建VN-融合蛋白A + VC-融合蛋白B表达载体
- 共转染细胞
- 培养24-48h恢复荧光
- 荧光显微镜/共聚焦观察
- 定量荧光强度
- 设阳性对照（已知互作对）和阴性对照（不互作蛋白）
📋 服务详情 / 客户提供
| 项目 | 要求 |
|---|---|
| 蛋白A序列 | CDS序列 |
| 蛋白B序列 | CDS序列 |
| 载体 | VN/VC载体或由平台提供 |
| 细胞系 | 指定细胞系 |
| 检测方式 | 荧光显微/共聚焦/流式 |
📊 结果展示
BiFC荧光图片、荧光强度统计图、实验报告。
📦 最终交付
BiFC荧光图片、荧光强度统计图、实验报告。
Q: BiFC荧光背景高怎么办
调整VN/VC表达比例（1:1或1:3）、降低转染量（0.2-0.5ug/孔 in 24-well）、设阴性对照（不互作蛋白VC）扣除自发互补信号、培养时间充足（48h）确保荧光蛋白折叠成熟。
Q: BiFC的荧光蛋白选择哪个好
常用Venus（YFP变体，折叠快、温度敏感性低）和GFP。若做多色实验可选不同光谱的荧光蛋白对（如VN-VC、mCherry NC片段）。
Q: BiFC和FRET区别
BiFC：荧光蛋白拆分重组，不可逆(一旦重组不可逆)，累积信号灵敏但无动力学。FRET：两荧光基团靠近时能量转移，可逆实时，但需荧光基团距离<10nm且方向匹配。BiFC适合低丰度互作检测和定位，FRET适合实时动态互作。BiFC简单灵敏但假阳性高(需严格对照)。
Q: BiFC假阳性怎么排除
1)设阴性对照(突变互作域的蛋白对)；2)设空载体对照(两片段各自不融合蛋白)；3)荧光定量(阳性信号>阴性对照3倍以上)；4)多区域验证(不同细胞区域均有信号)；5)文献已知非互作蛋白对作阴性；6)反向BiFC(交换N/C端融合)；7)配合Co-IP/FRET验证。
Q: BiFC用什么荧光蛋白
YN155/YC155(Venus YFP拆分)、GN173/GC155(GFP拆分)、VN173/VC155(mCherry拆分)。建议Venus YFP(背景低灵敏度高)。多色BiFC可同时检测多对互作(YFP-BiFC + CFP-BiVC)。注意：荧光蛋白拆分位点影响重组效率，需选已验证的拆分位点。
Q: BiFC能定量吗
半定量。荧光强度反映互作强度(但受表达水平影响)。需标准化：1)荧光强度/表达量比值(需内参荧光)；2)流式定量MFI(≥10,000细胞)；3)高内涵成像定量(每细胞荧光强度)。每组≥3复孔每孔≥5视野。设阴性对照倍数变化(阳性/阴性比值)。