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平行反应监测靶向质谱
📝 服务介绍
PRM利用Orbitrap高分辨质谱在MRM模式下选择性监测目标肽段，对特定蛋白进行高精度靶向定量验证，是DDA/DIA发现结果的验证金标准，适合临床转化标志物验证。
🔬 实验原理
PRM靶向定量蛋白质组原理：平行反应监测(Parallel Reaction Monitoring)是靶向定量方法，在四极杆质谱中选择目标肽段母离子(隔离窗口0.7-1.0Da)，在高分辨分析器(Orbitrap)中检测全部碎片离子，实现高选择性高灵敏度定量。无需合成重标肽段(SRM/MRM需要)即可靶向定量。
📋 应用领域
- 靶向蛋白精准定量(PRM/SRM)
- 候选标志物靶向验证
- 低丰度蛋白高灵敏度定量
- 批次间精确量化
- 临床样本靶向蛋白精确定量
- 差异蛋白候选靶点确认
⭐ 服务优势
- 高特异性：选择性监测目标肽段
- 高灵敏度：比DDA高10-100倍
- 高精度定量：CV<10%
- 验证金标准：标志物临床验证首选
🔄 服务流程
- 目标肽段选择（来自DDA/DIA发现）
- 合成重标肽段（SIL/AQUA）
- PRM方法开发（保留时间/碎裂模式优化）
- 样品分析（内标+目标肽段）
- Skyline数据处理提取离子色谱
- 绝对定量或相对定量
📋 服务详情 / 客户提供
| 项目 | 要求 |
|---|---|
| 目标蛋白/肽段 | 来自发现阶段的差异蛋白列表 |
| 样品 | 发现阶段同批样品 |
| 内标 | 重标肽段（AQUA/SIL） |
| 定量模式 | 绝对定量（加内标）/相对定量 |
| 样本数量 | 验证队列（临床样本） |
📊 结果展示
PRM提取离子色谱图、目标蛋白定量结果（绝对/相对）、方法验证参数（LOD/LOQ/线性范围/CV）及实验报告。
📦 最终交付
PRM提取离子色谱图、目标蛋白定量结果（绝对/相对）、方法验证参数（LOD/LOQ/线性范围/CV）及实验报告。
Q: PRM和MRM/SRM有何区别
PRM在Orbitrap高分辨质谱上运行（全碎片离子高分辨检测），MRM在三重四极杆上运行（选择特定碎片离子）。PRM分辨率更高、抗干扰更强、方法开发更简便；MRM灵敏度略高。
Q: PRM验证多少个目标蛋白合适
一般验证10-50个目标蛋白（每个蛋白1-2个unique肽段），平衡覆盖度和分析时间。样品多时可分批跑。建议加入内标重标肽段做绝对定量提高可靠性。
Q: PRM和SRM/MRM区别
PRM：高分辨检测全部碎片离子(Orbitrap分辨率>15,000)，选择性高(碎片离子精度区分干扰)，不需预优化碎片离子，简便快速。SRM/MRM：低分辨三重四极杆(QQQ)，需预选碎片离子(方法开发复杂)，灵敏度极高但选择性低(同量干扰难以区分)。靶向验证选PRM(简便高分辨)，超高通量筛查选MRM(成熟快速)。
Q: PRM怎么做
1)从发现数据(DDA/DIA)筛选差异肽段→选目标肽段(3-5肽段/蛋白)；2)建立PRM方法：输入母离子m/z和保留时间(scheduling window ±5min)；3)LC-PRM分析(隔离窗口0.7-1.0Da→HCD碎裂→Orbitrap检测碎片)；4)数据处理(Skyline/TraceFinder)：提取碎片离子XIC定量；5)用重标肽段做绝对定量(可选)。不需合成标准品(相对定量)。
Q: PRM需要多少上样量
1-2μg总蛋白/进样(与DDA相同)。PRM灵敏度比DDA高10-100倍(只检测目标肽段，离子注入时间长)。可检测低丰度蛋白(如转录因子/激酶)。如做绝对定量需合成重标肽段(AQUA肽段)做标准曲线。建议每蛋白选2-3个unique肽段，每肽段3-5个碎片离子定量。
Q: PRM和Western Blot区别
PRM：质谱靶向定量(不需抗体)，灵敏度高(fmol)，可同时定量50-200个蛋白(中通量)，绝对定量(加重标肽段)。WB：抗体检测(需抗体)，半定量，单蛋白检测，简便直观但依赖抗体质量。靶向前体验证(多蛋白同时定量)选PRM，已知蛋白单验证选WB。PRM可作为WB替代(不需抗体)。
Q: PRM能做什么
1)差异蛋白验证(发现数据→PRM验证关键差异)；2)绝对定量(AQUA重标肽段标准曲线→fmol/mL)；3)翻译后修饰定量(磷酸化/泛素化位点靶向)；4)生物标志物验证(临床样本多蛋白靶向定量)；5)药物靶点定量(药物处理后蛋白变化)。PRM是蛋白质组发现到验证转化的关键方法。建议DDA/DIA发现→PRM验证。