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TMT同位素标记定量
📝 服务介绍
TMT利用同位素标签标记不同样品的肽段氨基，混合后一次质谱分析同时比较多个样品蛋白表达差异，通量高、批次效应低，适合精确比较蛋白质组学研究。
🔬 实验原理
TMT/iTRAQ定量蛋白质组原理：TMT(Tandem Mass Tag)是同位素标记试剂，通过同位素标记肽段氨基基团，使不同样本肽段在一级质谱中质量相同(等量)，二级质谱碎裂后释放报告离子(126-134Da)实现多通道(6-16plex)定量。一次LC-MS可同时比较多个样本。
📋 应用领域
- 多组样本（可达16plex）TMT定量
- 组间差异蛋白高通量定量
- 标记定量增强检测灵敏度
- 多时间点/多处理组比较
- 蛋白表达定量与统计检验
- 药物处理蛋白质组响应谱
⭐ 服务优势
- 多重标记：6-18标同批比较
- 批次效应低：混合后一次检测
- 定量精确：报告离子信号比值
- 缺失值少：定量化覆盖度高
🔄 服务流程
- 蛋白提取定量（每组>=30ug）
- 胰酶酶切肽段
- TMT试剂标记（不同标签标记不同样品）
- 标记效率验证
- 混合标记肽段
- 高pH反相色谱分级（Fractions 8-20级）
- LC-MS/MS分析（Orbitrap）
- 定量分析
📋 服务详情 / 客户提供
| 项目 | 要求 |
|---|---|
| 样品 | 蛋白量>=30ug/样本（浓度>=1ug/uL） |
| 样本数量 | TMT 6标/10标/16标/18标 |
| 分组 | 明确标记分配方案 |
| 分析需求 | 差异蛋白/GO/KEGG/聚类 |
| 特殊要求 | 高pH分级深度覆盖 |
📊 结果展示
差异蛋白列表、火山图/热图、GO/KEGG分析、聚类分析图及实验报告。
📦 最终交付
差异蛋白列表、火山图/热图、GO/KEGG分析、聚类分析图及实验报告。
Q: TMT ratio压缩效应如何解决
TMT二级报告离子在多共流出肽段时比值被压缩。使用SPS-MS3（Orbitrap Fusion系列）或窄窗口选择减少干扰，或使用Complement Ion TMT（CI-TMT）校正方法。
Q: TMT能标记多少样本
TMT 6标（6个通道）TMT 10标、TMT 16标和TMT 18标。超过通道数需分批跑，使用bridge sample连接批次。建议同一实验同一批次完成。
Q: TMT几通量怎么选
TMT 6plex(6通道) TMT 10plex(10通道) TMT 11plex TMT 16plex(16通道) TMTpro 18plex。通量越高成本越低(每个样本分摊费用低)但受比值压缩效应更强(动态范围受限)。建议10plex(平衡通量和成本)，需要更多样本时16plex。每批次设内标(混合各样本等量肽段)校正批次效应。
Q: TMT比值压缩效应怎么办
比值压缩(Ratio Compression)：TMT报告离子信号比值被压缩(真实2倍变化测到1.3倍)，原因：1)同位素纯度(杂质干扰)；2)共洗脱肽段干扰(二级碎裂时混入其他肽段报告离子)；3)前体选择窗口宽。缓解方法：1)使用SPS-MS3(同步母离子选择二级碎裂报告离子，最准确)；2)窄窗口隔离(0.4-0.7Da)；3)离子迁移率(FAIMS)分离共洗脱肽段。建议SPS-MS3。
Q: TMT实验怎么做
1)蛋白提取+定量(各组1-2mg)；2)还原(TCEP)+烷基化(碘乙酰胺)+胰酶消化(FASP/溶液)；3)肽段除盐(Oasis/C18)；4)TMT标记(各通道分别标记，1h室温)；5)淬灭(羟胺)；6)等量混合各通道肽段；7)高pH反相分级(High pH RP fractionation 8-12级分)；8)LC-MS/MS分析；9)搜库定量(报告离子强度)。总计2-3天。
Q: TMT定量准确度
CV 5-15%(优于Label-free)。比值压缩后动态范围2-3倍(真实动态范围可能10倍)。需设技术重复(≥2-3)。FDR<1%(Target-Decoy)。差异蛋白阈值：Fold Change>1.3-1.5(压缩后)且p<0.05。比值压缩效应使阈值降低(1.3 vs Label-free 1.5)。建议SPS-MS3减少比值压缩。设内标(混合等量各样本)校正批次差异。
Q: TMT和iTRAQ区别
TMT：Thermo公司，6-18plex，碎片报告离子126-134Da，需SPS-MS3或MS2检测。iTRAQ：AB Sciex公司，4-8plex，碎片报告离子114-121Da，已被TMT取代(通量低/比值压缩更严重)。TMTpro(16/18plex)：更大报告基团，更窄同位素纯度校正。建议TMT(通量高/试剂稳定)。TMTpro 16plex/18plex适合大队列。