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小肠/结直肠类器官培养
📝 服务介绍
肠道类器官从小肠隐窝或结肠隐窝分离Lgr5+干细胞，在Matrigel中培养形成含有干细胞、潘氏细胞、杯状细胞、肠内分泌细胞等多种细胞类型的三维类器官，是研究肠道生理病理的重要模型。
🔬 实验原理
肠道类器官原理：肠道干细胞(Lgr5⁺隐窝细胞)在Matrigel中3D培养，加入Wnt/R-spondin/Noggin/EGF因子后自组织形成隐窝-绒毛结构，包含肠上皮所有细胞类型(吸收/杯状/潘氏/内分泌/干细胞)，是肠道稳态和疾病研究的关键模型。
📋 应用领域
- 肠道类器官培养与维持
- 肠道干细胞生物学研究
- 肠道屏障功能与通透性分析
- 溃疡性结肠炎/克罗恩病模型
- 肠道类器官病毒/细菌感染研究
- 肠-免疫互作与炎症研究
⭐ 服务优势
- 多细胞类型：模拟肠道上皮细胞组成
- 干细胞培养：保留自我更新能力
- 可传代扩增：传代>20代保持稳定
- 疾病建模：IBD/肠癌/感染模型
🔄 服务流程
- 小肠/结肠组织取样
- 清洗去除内容物
- EDTA消化分离隐窝
- 离心收集隐窝
- Matrigel包埋接种
- 加入IntestiCult培养基
- 2-3天出芽7-10天传代
📋 服务详情 / 客户提供
| 项目 | 要求 |
|---|---|
| 组织来源 | 小鼠肠段或人手术标本 |
| 类器官类型 | 小肠隐窝/结肠隐窝 |
| 培养基 | IntestiCult或由平台配制 |
| 用途 | 干细胞研究/药物筛选/感染模型 |
📊 结果展示
肠道类器官（培养中/冻存管）、明场图片、HE/IF鉴定结果及实验报告。
📦 最终交付
肠道类器官（培养中/冻存管）、明场图片、HE/IF鉴定结果及实验报告。
Q: 隐窝分离效率低怎么办
确保EDTA消化时间和浓度（2mM EDTA 4C 30min for 小鼠小肠），消化前充分清洗去除黏液。用70um筛网过滤分离隐窝（隐窝可通过但组织碎片被截留）。
Q: 肠道类器官传代比例怎么定
一般1:3-1:5传代，每7-10天传代一次。消化时用TrypLE或机械吹打将类器官分散为片段（不要完全消化为单细胞），有助于维持干细胞活力。
Q: 肠道类器官培养基配方是什么
基础培养基(Advanced DMEM/F12)+B27(1×)+N2(1×)+GlutaMAX+HEPES+青链霉素+生长因子：EGF(50ng/mL)+R-spondin1(500ng/mL)+Noggin(100ng/mL)+Wnt3a(100ng/mL)+CHIR99021(3μM)+Valproic acid(1mM)+Y-27632(10μM 首次传代加)。不同区段(小肠/结肠)配方略有调整。
Q: 肠道类器官怎么来源
1)正常肠道：小鼠小肠/结肠隐窝分离EDTA 30min 4°C→离心→Matrigel接种；2)肿瘤：患者手术标本消化(Dispase+Collagenase)→Matrigel接种；3)iPSC分化：定向分化为肠上皮(Intestinal lineage)；4)单细胞Lgr5⁺干细胞分选后培养。小鼠隐窝分离简便。
Q: 肠道类器官包含哪些细胞
隐窝-绒毛结构含：肠上皮吸收细胞(Enterocytes)、杯状细胞(Goblet，黏液分泌)、潘氏细胞(Paneth，防御素)、内分泌细胞(Chromogranin A+)、干细胞(Lgr5⁺)、Tuft细胞(DCLK1⁺)、M细胞。可通过IHC/IF标志物确认。潘氏细胞在隐窝底部，干细胞在隐窝基底部。
Q: 肠道类器官能做什么研究
1)肠道干细胞自我更新和分化机制；2)炎症性肠病(IBD)建模(加炎症因子)；3)肠道感染(细菌/病毒共培养)；4)药物吸收和毒性评价(屏障功能TEER)；5)肠道肿瘤发生(基因编辑APC/KRAS)；6)肠道再生修复(放射损伤后恢复)。